本文關(guān)鍵詞：不同凍存時(shí)間后脂肪組織顆粒細(xì)胞存活率的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：背景:1893年,有學(xué)者首次報(bào)道了使用自體脂肪移植術(shù)來(lái)修復(fù)自體軟組織缺陷。但其存在的移植后受區(qū)的高吸收率,是困擾醫(yī)生與患者的一個(gè)重大難題。移植后部分的脂肪組織壞死液化,可能是導(dǎo)致自體脂肪移植高吸收率的主要原因。如此高的吸收率,導(dǎo)致需要進(jìn)行多次自體脂肪移植術(shù),患者承受多次痛苦和再次高消費(fèi),脂肪供區(qū)凹凸不平,發(fā)病率和不適感增高的可能性等問(wèn)題。所以,為了解決這一難題,尋找一種能夠長(zhǎng)期保存自體脂肪的方法,對(duì)醫(yī)生和患者而言,都是不可或缺的。自1990年Forunier提出了脂肪組織凍存的概念以來(lái),眾多學(xué)者進(jìn)行了一系列關(guān)于自體冷凍脂肪的實(shí)驗(yàn)和臨床研究。包括脂肪組織、脂肪細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞的冷凍保存。而且有研究報(bào)道,冷凍脂肪的移植相較新鮮脂肪移植而言,術(shù)后受區(qū)的水腫和淤青更不明顯。也有關(guān)于脂肪冷凍前進(jìn)行脂肪獲取方法的優(yōu)化;脂肪冷凍時(shí)控制冷凍速率并加入冷凍保護(hù)劑;在㧟20℃的常用冷凍溫度下,也使用-80℃以及液氮溫度(㧟196℃)下保存脂肪等報(bào)道。但是由于常用的冷凍保護(hù)劑存在移除困難和部分冷凍保護(hù)劑有一定毒性的特點(diǎn),臨床上添加了冷凍保護(hù)劑保存的脂肪,幾乎沒(méi)有將其運(yùn)用于人自體脂肪移植術(shù)的報(bào)道。有報(bào)道稱,在溫度為-20℃,且不控制其冷凍速率而且不使用冷凍保護(hù)劑的情況下冷凍脂肪組織時(shí),產(chǎn)生的冷凍損傷是很少的,通過(guò)復(fù)溫后,仍然發(fā)現(xiàn)了活的脂肪組織,并且在臨床上也得到了應(yīng)用。近10年來(lái),國(guó)內(nèi)外的學(xué)者做了大量關(guān)于冷凍脂肪組織的研究和冷凍方法的優(yōu)化。諸多有差異甚至相反的觀點(diǎn)都可以在文獻(xiàn)中找到,且并沒(méi)有對(duì)冷凍脂肪方法形成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的理論。而目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于離心純化人顆粒脂肪組織在常用冷凍低溫不同冷凍時(shí)間保存下脂肪細(xì)胞存活率的實(shí)驗(yàn)研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。目的:本次研究將人顆粒脂肪組織與生理鹽水混合液在提純和離心后,置于常用冰箱(㧟20℃)中,凍存不同時(shí)間后觀察分析復(fù)溫后脂肪組織的的細(xì)胞代謝改變、細(xì)胞活力等方面,初步探討在常用冷凍低溫保存下脂肪的細(xì)胞存活率變化,為冷凍脂肪的進(jìn)一步優(yōu)化以及標(biāo)準(zhǔn)化,提供相關(guān)理論參考和基礎(chǔ)性的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:抽取獲得經(jīng)離心純化后的人脂肪組織顆粒,直接置于-20℃冰箱中凍存1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月復(fù)溫后取出與新鮮脂肪組織作對(duì)比,復(fù)溫后觀察脂肪組織顆粒的形態(tài)體積變化,組織石蠟包埋切片he染色觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)是否完整,臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)測(cè)定脂肪組織顆粒存活率,組織冰凍切片油紅o染色觀察脂肪細(xì)胞中脂滴形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率,葡萄糖轉(zhuǎn)移量法測(cè)定細(xì)胞活性。結(jié)果:脂肪組織顆粒形態(tài)學(xué)觀察顯示,經(jīng)凍存復(fù)溫后的脂肪組織顆粒隨凍存時(shí)間的延長(zhǎng),顏色由鮮黃色逐漸變淡,油脂雜質(zhì)逐漸增多。he染色顯示,凍存1、2個(gè)月后的脂肪組織顆粒,組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整,與新鮮脂肪形態(tài)上無(wú)明顯差異。凍存3、6、9個(gè)月后的脂肪組織顆粒,雖然存在一定的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu),但細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量逐漸降低。凍存時(shí)間為12、24個(gè)月后,組織細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)已嚴(yán)重破壞。臺(tái)盼藍(lán)染色經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀定量分析后,結(jié)果顯示:與新鮮脂肪組織顆粒相比較,脂肪組織顆粒隨著凍存時(shí)間的增加,存活率逐漸降低;在凍存1、2個(gè)月之后存活率下降的均不明顯,與對(duì)照組之間存活率無(wú)明顯差異(p0.05);凍存時(shí)間為3個(gè)月時(shí),存活率開(kāi)始下降,與對(duì)照組之間存活率存在明顯差異(p0.05);凍存時(shí)間增加至6個(gè)月后,存活率有明顯降低,隨著凍存的時(shí)間的增加,存活率逐漸下降;直至凍存時(shí)間為24個(gè)月的標(biāo)本,存活率為3.30%±1.54%(p0.05)。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率,結(jié)果顯示,凍存時(shí)間為1、2個(gè)月的脂肪組織顆粒與對(duì)照組比較,細(xì)胞凋亡比例無(wú)明顯差異(p0.05);凍存時(shí)間增加為3個(gè)月時(shí)細(xì)胞凋亡比例存在明顯的下降,并隨著凍存時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡比例逐漸增加,至凍存24個(gè)月后,細(xì)胞凋亡比例為94.2%±4.55%(p0.05)。油紅o染色結(jié)果顯示,新鮮脂肪組織顆粒鏡下存在絕大部分被染紅的脂滴和藍(lán)染胞核;凍存時(shí)間為1、2個(gè)月時(shí)鏡下凍存脂肪組織顆粒被染紅的脂滴和藍(lán)染胞核數(shù)量并未出現(xiàn)明顯變化;凍存時(shí)間為3個(gè)月時(shí)被染紅的脂滴和藍(lán)染胞核數(shù)量下降,紅色脂滴互相融合成大脂滴;隨著凍存時(shí)間的增加,被染紅的脂滴和藍(lán)染胞核數(shù)量下降明顯,大部分為被染紅的融合大脂滴;至凍存時(shí)間為24個(gè)月時(shí),鏡下紅色脂滴較少見(jiàn)。葡萄糖轉(zhuǎn)移量實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞活性結(jié)果顯示,以新鮮脂肪組織顆粒細(xì)胞活性為100%,通過(guò)葡萄糖轉(zhuǎn)移量計(jì)算出不同時(shí)間凍存脂肪組織顆粒的細(xì)胞活性。結(jié)果顯示,凍存時(shí)間為1、2個(gè)月時(shí)細(xì)胞活性分別為94.7%±4.40%和92.5%±5.10%,細(xì)胞活性與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P0.05)。凍存時(shí)間增加為3個(gè)月時(shí),細(xì)胞活性為75.3%±4.80%,細(xì)胞活性顯著下降且與對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。凍存時(shí)間逐漸增加時(shí),細(xì)胞活性逐漸下降,至凍存時(shí)間為24個(gè)月時(shí)細(xì)胞活性為4.9%±3.20%。結(jié)論:離心純化人脂肪組織顆粒在-20℃下凍存2個(gè)月內(nèi),脂肪細(xì)胞存活率與新鮮脂肪組織顆粒無(wú)明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：低溫 人顆粒脂肪組織 冷凍保存 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R622.9
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-14
• 第1章 前言14-16
• 第2章 材料與方法16-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析21-22
• 第3章 結(jié)果22-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附錄44-46
• 文獻(xiàn)綜述46-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 發(fā)表文章58-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 謝紅炬;鄧穎;李明;羅惠中;陳碾;;自體純化冷凍微粒脂肪注射移植修復(fù)面部皮膚軟組織老化性萎縮凹陷[J];中國(guó)組織工程研究;2012年05期

2 王華;杜立業(yè);李華;;微生物液氮超低溫保存研究進(jìn)展[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2011年01期

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本文編號(hào)：981223