本文關(guān)鍵詞：shRNA定向PPARγ基因預(yù)防及治療激素性O(shè)NFH實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建針對過氧化物酶體增殖子活化受體(Peroxisome proliferator acti-vated receptor gamma,PPARγ)致病靶基因的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA),然后通過腺病毒載體導(dǎo)入兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中,觀察shRNA對PPARγ基因的靶向調(diào)控功能,及對激素誘導(dǎo)BMSCs成脂和成骨分化的影響,探索對激素性股骨頭缺血性壞死(Osteonecrosis Of The Femoral Head,ONFH)預(yù)防及治療作用。方法:1實(shí)驗(yàn)分組:兔BMSCs傳代至第二代,隨機(jī)分為6組,接種到6孔培養(yǎng)板中,每孔接種密度為5×104個(gè)/ml。(1)正常對照組(N):正常培養(yǎng)細(xì)胞,不做任何處理。(2)激素模型組(M):加地塞米松并使其濃度保持10-7 mol/L。(3)腺病毒空載體組(C):同時(shí)加入激素與腺病毒,使腺病毒數(shù)量是培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的20倍,達(dá)到充分的轉(zhuǎn)染。(4)、(5)、(6)干擾1、2、3組(I1、I2、I3):同時(shí)加入地塞米松與靶向PPARγ基因的三種shRNA腺病毒。2觀測各組細(xì)胞熒光含量,及腺病毒與細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。3細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的第5、7、10天,使用實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Quantitative polymerase raction,qPCR)檢測6組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)PPARγ基因及骨成型蛋白質(zhì)(Bone morphogenetic protein,BMP-2)基因的表達(dá)量。4細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的第9天,使用全自動(dòng)生化分析儀儀器檢測各實(shí)驗(yàn)組堿性磷酸酶(alternativeliquiditypool,alp)含量,14天檢測甘油三酯(totalglyceride,tg)含量。5細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的14天使用油紅o染色,第15天脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù),觀察各組細(xì)胞脂肪分化程度。結(jié)果:1qpcr結(jié)果:m組與e組細(xì)胞內(nèi)的pparγ基因mrna相對n組呈高表達(dá),兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。i1、i2、i3組細(xì)胞內(nèi)的pparγ基因相對n組呈低表達(dá),兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與此不同,m組及e組細(xì)胞內(nèi)的bmp-2基因mrna相對n組呈低表達(dá),兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。i1、i2、i3組細(xì)胞內(nèi)的bmp-2基因與n組表達(dá)水平接近,兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2tg含量顯示,m組及e組中細(xì)胞內(nèi)tg含量相對n組增加,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。i1、i2、i3組細(xì)胞內(nèi)tg檢測值接近于n組,兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但是低于m組和e組,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)3alp活性含量顯示,m組及e組alp活性含量與n組比較降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。i1、i2、i3組中alp含量與n組含量相近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4脂肪細(xì)胞染色與計(jì)數(shù):實(shí)驗(yàn)的第15天油紅o染色,計(jì)數(shù)脂肪細(xì)胞。m、e組比n組數(shù)量明顯增多,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),n組與i1、i2、i3組數(shù)量相近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1 shRNA技術(shù)能夠靶向調(diào)節(jié)PPARγ基因,下調(diào)PPARγ基因在BMSCs中表達(dá),抑制激素誘導(dǎo)BMSCs成脂分化。2 shRNA技術(shù)為預(yù)防及治療激素性O(shè)NFH提供新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：ONFH BMSCs 激素 shRNA 腺病毒 PPARγ
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.8
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述：股骨頭壞死早期治療方法研究進(jìn)展46-62
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 附錄62-63
• 個(gè)人簡歷63
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

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1 任黔川;彭芝蘭;譚欣;;PPARγ在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年23期

2 張乾勇;PPAR的結(jié)構(gòu)與功能及其生物學(xué)作用[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);2000年05期

3 白玉杰,牛丹,趙錦榮,張文紅,呂貫廷,閻小君;Rapid detection of PPAR_γ gene Pro12Ala polymorphism with fluorescence polarization in Chinese population[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年03期

4 袁平戈;PPARα的主要功能是什么[J];中華肝臟病雜志;2003年05期

5 潘光棟;PPAR-γ及其配體在人體細(xì)胞的分子研究[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;2003年02期

6 曹廷兵,葉治家,彭家和,鞏燕,黃剛;人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)純化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年01期

7 王剛,陳繼俊,倪沛洲;PPARα受體亞型與新藥研究[J];藥學(xué)進(jìn)展;2004年01期

8 葉平;過氧化體增殖物激活型受體(PPAR)與心血管疾病[J];中華心血管病雜志;2004年07期

9 孫曙光,周智廣;PPARγ與1型糖尿病[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;2005年02期

10 胡桂芳,武革;PPARγ與2型糖尿病大血管病變的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

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1 ;Genetic polymorphisms of PPAR-γ,HHEX,PTPRD,KCNQ1,and SRR affect therapeutic efficacy of Pioglitazone in Chinese Patients with type 2 diabetes[A];傳承與發(fā)展，創(chuàng)湖南省生理科學(xué)事業(yè)的新高——湖南省生理科學(xué)會(huì)2011年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

2 ;Dynamic analysis and ligand binding affinity investigation of PPAR mutations[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2003年

3 童南偉;;過氧化物酶增殖物激活受體(PPAR)a與脂質(zhì)代謝[A];全國首屆代謝綜合征的基礎(chǔ)與臨床專題學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

4 王偉銘;章慧娣;劉峰;陳佳韻;陳楠;;PPARγ活化對腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的作用研究[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

5 陳剛;林新富;梁繼興;林麗香;沈曉麗;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)基因多態(tài)性與老年男性骨質(zhì)疏松癥相關(guān)性研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

6 陳剛;林新富;梁繼興;林麗香;沈曉麗;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)基因多態(tài)性與老年男性骨質(zhì)疏松癥相關(guān)性研究[A];2008中國醫(yī)師協(xié)會(huì)內(nèi)分泌代謝科醫(yī)師分會(huì)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 李潔;戴愛國;胡瑞成;朱黎明;王梅芳;;PPARγ影響γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表達(dá)在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[A];中國生理學(xué)會(huì)第23屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

8 管又飛;;脂質(zhì)過氧化物體增殖物激活受體γ(PPAR γ)與糖尿病腎病[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)暨第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議專題講座匯編[C];2004年

9 孫莉;尚進(jìn)林;梁浩;程焱;;PPAR全激動(dòng)劑對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

10 ;Endothelial PPARγmediates anti-inflammatory actions of rosiglitazone through dissociation of NF-κB[A];中國生理學(xué)會(huì)心血管生理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐錚奎;發(fā)現(xiàn)PPAR拮抗劑[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2012年

2 曾凡新邋林敏;PPAR激動(dòng)劑類抗糖尿病藥研發(fā)喜憂參半[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

3 袁松范;開發(fā)PPAR多通道激動(dòng)劑須謹(jǐn)慎[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

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1 劉炳婷;SUMO特異性蛋白酶1調(diào)控脂肪形成的作用及分子機(jī)制[D];上海交通大學(xué);2014年

2 陳宏;巨噬細(xì)胞PPARγ對皮膚傷口愈合的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 韓晶;PPARγ在腦缺血再灌注損傷和過氧化氫損傷中的調(diào)控機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

4 張巖;PPARα/γ信號(hào)通路在高脂性脂肪性肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 張鷗;阿托伐他汀對動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血中PPAR γ的作用研究及相關(guān)炎癥因子與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系的建模分析[D];鄭州大學(xué);2016年

6 周毅;PPARγ介導(dǎo)的抗氧化機(jī)制在血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中作用和機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

7 滕志朋;PPARβ/δ在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

8 佟強(qiáng);PPARβ/δ激活在帕金森病中的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

9 王伶;高靜水壓刺激對血小板活化的影響及PPARγ的保護(hù)作用的研究[D];南昌大學(xué);2008年

10 孫晶;PPARγ1對系膜細(xì)胞外基質(zhì)生成的抑制作用及其機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

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1 曹智麗;過氧化物酶增殖物激活受體α（PPARα）在大鼠酒精性肝病發(fā)生過程中的變化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 宋石;miR-27a通過靶向調(diào)控PPARγ對酒精誘導(dǎo)大鼠BMSC分化的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

3 鄒佳楠;PPAR-γ在IgA腎病發(fā)生中的作用及其機(jī)理研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 李春梅;家兔PPARγ和MYF5基因多態(tài)性及其與部分經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 李曉鵬;腦膠質(zhì)瘤中PPARγ、Bcl-2基因表達(dá)水平及臨床意義[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

6 李晉福;慢病毒介導(dǎo)PPAR-γ基因?qū)︸：鄹泶癯衫w維細(xì)胞增殖、遷移、侵襲性的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

7 徐穎;EGFR/MDM2信號(hào)通過PPARγ降解途徑促進(jìn)NFκB激活[D];江蘇大學(xué);2016年

8 高家明;PPARα/Bcl2信號(hào)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[D];江蘇大學(xué);2016年

9 冷銀芝;低劑量雙酚A通過PPARγ促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

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