本文關(guān)鍵詞：腸三葉因子減輕燒傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)腸上皮細(xì)胞谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 燒傷 谷氨酰胺 腸三葉因子 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 自噬 AMPK ASCT2 B~0AT1 PDI

【摘要】：研究背景及目的大面積嚴(yán)重?zé)齻艘鹌つw損毀之外還可導(dǎo)致多種內(nèi)臟功能嚴(yán)重受損,其中胃腸道是燒傷后受損最為嚴(yán)重的器官之一。燒傷后缺血缺氧性損害是導(dǎo)致胃腸道受損的首要原因,缺血缺氧不僅直接導(dǎo)致胃腸道組織結(jié)構(gòu)受損,還可因缺氧造成的能量代謝障礙加重黏膜受損,抑制黏膜修復(fù)。相關(guān)研究表明,小腸所需的主要能源物質(zhì)是谷氨酰胺(glutamine,Gln)而非葡萄糖。Gln能夠促進(jìn)腸黏膜修復(fù),改善腸道功能。系列研究已證實(shí),燒傷動(dòng)物和患者給予Gln后能明顯改善腸道能量代謝,促進(jìn)ATP合成,進(jìn)而減輕腸黏膜受損程度,促進(jìn)黏膜修復(fù),改善腸道功能。已有研究表明,嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染及膿毒癥等情況下,腸道對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)能力降低。燒傷屬于嚴(yán)重創(chuàng)傷,有理由相信燒傷與創(chuàng)傷具有類似的病理生理變化。腸三葉因子(Intestinal trefoil factor,ITF)是杯狀細(xì)胞分泌的腸道特異的生長(zhǎng)因子,能減輕燒傷后腸黏膜損傷,但是否能改善燒傷后腸道對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)目前尚不清楚。本研究將著重探討嚴(yán)重?zé)齻竽c上皮細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)能力的變化規(guī)律以及ITF對(duì)其的影響,并探討其分子機(jī)制。研究方法1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):將120只Sprague-dawley大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control),燒傷對(duì)照組(Burn),燒傷+ITF治療組(Burn+ITF)。所有大鼠均給予腹腔注射苯巴比妥鈉(40mg/kg.weight)麻醉,然后皮下注射鎮(zhèn)痛劑丁丙諾啡(0.05 mg/kg body weight),使用推毛機(jī)剃除背部和兩側(cè)體毛,露出30%體表面積以供燙傷。Control組大鼠置于37℃水浴中18秒模擬燙傷模型,其余各組大鼠置于97℃水浴中18秒制作30%體表面積Ⅲ°燒傷大鼠模型。傷后各組均立即腹腔注射乳酸林格液(40m L/kg.weight)復(fù)蘇,燙傷大鼠置于烤溫架待其蘇醒,各組均給予正常飲食及飲水。Burn+ITF組于燙傷后6小時(shí)灌胃給予ITF(1mg/kg.d),其余各組灌胃等體積生理鹽水。各組大鼠分別于燙傷后(post burn day,PBD)1、3、5、7天處死大鼠,取出小腸,提取大鼠小腸上皮細(xì)胞及其紋狀緣囊泡。采用鈣離子螯合法提取大鼠小腸上皮細(xì)胞(intestinal epithelial cells,IECs),采用Mg2+低溫差速離心法制備大鼠小腸紋狀緣囊泡(brush-border membrane viscles,BBMVs),同位素計(jì)數(shù)法檢測(cè)通過(guò)IECs和BBMVs的[3H]-glutamine的放射性強(qiáng)度,計(jì)算出IECs和BBMVs對(duì)[3H]-Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)率。采用透射電子顯微鏡觀察BBMVs的形態(tài)學(xué)變化,western blot檢測(cè)大鼠IECs中Gln轉(zhuǎn)運(yùn)載體ASCT2,B~0AT1及其相關(guān)調(diào)控蛋白表達(dá)量的變化。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)大鼠小腸上皮細(xì)胞株IEC-6,采用10%燒傷大鼠血清培養(yǎng)IEC-6模擬細(xì)胞燒傷模型。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(Control),燒傷對(duì)照組(Burn),燒傷大鼠血清與ITF(10μg/m L)共培養(yǎng)組(Burn+ITF),燒傷大鼠血清+ITF(10μg/m L)+Compound C(10μmol/L)共培養(yǎng)組(Burn+ITF+Cp C),燒傷大鼠血清+ITF(10μg/m L)+3-MA(5mmol/L)共培養(yǎng)組(Burn+ITF+3-MA),燒傷大鼠血清+ITF(10μg/m L)+16F16(10μmol/L)共培養(yǎng)組(Burn+ITF+16F16)。采用同位素計(jì)數(shù)法檢測(cè)通過(guò)IEC-6的[3H]-glutamine的放射性強(qiáng)度,計(jì)算出IEC-6對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)率,western blot檢測(cè)IEC-6中Gln轉(zhuǎn)運(yùn)載體ASCT2,B~0AT1及其相關(guān)調(diào)控蛋白表達(dá)量的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.嚴(yán)重?zé)齻蟠笫驣ECs和BBMVs對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)能力均明顯降低,其中Na+依賴性轉(zhuǎn)運(yùn)載體介導(dǎo)的Gln轉(zhuǎn)運(yùn)降低的幅度更為明顯,非Na+依賴性載體轉(zhuǎn)運(yùn)Gln的變化趨勢(shì)除傷后1-3天外,其他時(shí)相點(diǎn)均明顯高于傷前。2.正常大鼠腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)Gln的部位主要位于紋狀緣,大約占總量的65%。嚴(yán)重?zé)齻笤摫壤蠓陆�。腸上皮細(xì)胞以及BBMVs對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)主要依靠Na+依賴性載體,該載體在腸上皮細(xì)胞以及BBMVs中介導(dǎo)的Gln轉(zhuǎn)運(yùn)量分別占總轉(zhuǎn)運(yùn)量的75%和85%,燒傷后該比例降至55%和60%,降幅均達(dá)25%左右。3.給予ITF能夠明顯促進(jìn)燒傷后大鼠IECs及BBMVs對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)。在兩型轉(zhuǎn)運(yùn)載體中,ITF主要影響Na+依賴型轉(zhuǎn)運(yùn)載體的活性,對(duì)非Na+依賴型載體的影響則不明顯。ITF提高了Na+依賴型Gln轉(zhuǎn)運(yùn)載體的活性,進(jìn)而提高了腸上皮細(xì)胞和BBMVs中該型載體轉(zhuǎn)運(yùn)Gln所占的比例。4.嚴(yán)重?zé)齻?BBMVs空間結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損,表現(xiàn)為形態(tài)極不規(guī)則,囊泡破損,泡壁塌陷,邊緣毛糙,鏡下可見諸多囊泡破損碎片;給予ITF 5天能夠明顯改善BBMVs形態(tài),直至給藥7天,其形態(tài)已接近正常,泡膜結(jié)構(gòu)完整,泡腔飽滿,整體輪廓清晰,但邊緣仍顯毛糙。5.嚴(yán)重?zé)齻?-7天,大鼠IECs中Na+依賴型Gln轉(zhuǎn)運(yùn)載體ASCT2、B~0AT1蛋白合成量均明顯降低,給予ITF能夠明顯促進(jìn)ASCT2及B~0AT1合成,至給藥7天,ASCT2、B~0AT1已基本恢復(fù)正常水平。6.嚴(yán)重?zé)齻?-5天,大鼠IECs中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白CHOP表達(dá)明顯升高,PDI表達(dá)明顯降低;給予ITF能夠明顯抑制CHOP表達(dá),同時(shí)提高PDI表達(dá)水平。7.嚴(yán)重?zé)齻?大鼠IECs中AMPK磷酸化水平明顯降低,自噬水平升高;給予ITF能夠上調(diào)AMPK磷酸化水平,自噬水平升高幅度更大。8.燒傷血清培養(yǎng)IEC-6細(xì)胞12h,ASCT2、B~0AT1、PDI蛋白水平和AMPK磷酸化水平均明顯降低,同時(shí),CHOP表達(dá)量、LC3-II/I值升高,IEC-6細(xì)胞對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)能力降低。給予ITF能夠降低CHOP表達(dá),增大LC3-II/I升高幅度,同時(shí)通過(guò)上調(diào)PDI、ASCT2、B~0AT1蛋白表達(dá)水平,促進(jìn)IEC-6對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)能力。無(wú)論是抑制PDI,自噬,還是AMPK磷酸化,均可以抵消ITF對(duì)IEC-6細(xì)胞的生物學(xué)活性。結(jié)論1.大鼠腸上皮細(xì)胞及BBMVs對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)主要依靠鈉依賴型載體,嚴(yán)重?zé)齻?IECs及BBMVs中鈉依賴性Gln轉(zhuǎn)運(yùn)明顯降低。ITF能夠通過(guò)促進(jìn)IECs及BBMVs中鈉依賴性Gln轉(zhuǎn)運(yùn)從而提高燒傷后大鼠腸上皮細(xì)胞對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)。2.ITF通過(guò)提高腸上皮細(xì)胞中鈉依賴型Gln轉(zhuǎn)運(yùn)載體ASCT2、B~0AT1的蛋白表達(dá)水平,進(jìn)而提高IECs對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)。3.ITF還通過(guò)維護(hù)燒傷后BBMVs的形態(tài)結(jié)構(gòu)促進(jìn)腸上皮細(xì)胞對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)。4.ITF通過(guò)上調(diào)燒傷后AMPK磷酸化水平,增強(qiáng)自噬,減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,維護(hù)PDI的含量,促進(jìn)ASCT2、B~0AT1形成正確的空間結(jié)構(gòu),最終促進(jìn)腸道對(duì)Gln的轉(zhuǎn)運(yùn)。
【關(guān)鍵詞】：燒傷 谷氨酰胺 腸三葉因子 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 自噬 AMPK ASCT2 B~0AT1 PDI
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R644
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料與方法14-17
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 4. 結(jié)果21-39
• 5. 討論39-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 文獻(xiàn)綜述 自噬在維護(hù)腸道穩(wěn)定中的作用51-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 在讀碩士期間發(fā)表文章60-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬正偉;腸三葉因子研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(創(chuàng)傷與外科基本問(wèn)題分冊(cè));2000年04期

2 盧雅丕;任建林;;三葉因子家族研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2003年12期

3 曲儀慶,肖偉,黃紹光;三葉因子家族肽在呼吸道中的作用研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2004年04期

4 孫勇;彭曦;;腸三葉因子研究進(jìn)展[J];腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);2006年04期

5 雷琳;姜海行;;腸三葉因子的研究進(jìn)展[J];內(nèi)科;2007年01期

6 蔡稼燕;任建林;張靖;;三葉因子1的研究與進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2007年21期

7 余果宇;張勇;張?jiān)?;三葉因子的研究進(jìn)展[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年01期

8 鐘雪梅,劉偉;三葉因子在胃腸道中的作用機(jī)制研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));2003年05期

9 陳美婭;張靖;任建林;;三葉因子3研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2008年20期

10 盧雅丕;周飛;王琳;張波;董菁;任建林;;人腸三葉因子真核載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年09期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張勇;王嚴(yán)戒;余國(guó)雨;向陽(yáng);高茜;李文輝;張?jiān)?;兩棲類三葉因子活化人血小板的分子機(jī)制[A];第九屆中國(guó)生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要[C];2009年

2 王艷茹;口如琴;蘇云鵬;李令媛;俞梅敏;茹炳根;;人三葉因子3及其突變體的研究[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

3 孫勇;彭曦;張勇;呂尚軍;吳煒;汪仕良;;腸三葉因子的純化、理化性質(zhì)及其穩(wěn)定性研究[A];第五屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

4 王海波;佟云鵬;茹炳根;;人三葉因子3誘導(dǎo)的人結(jié)腸上皮癌細(xì)胞差異展示蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2005年

5 孫勇;彭曦;汪仕良;;腸三葉因子的純化、理化性質(zhì)及其生物活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)營(yíng)養(yǎng)支持學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

6 陶凌暉;彭曦;汪仕良;王鳳君;王裴;;反相高效液相色譜法測(cè)定燒傷大鼠腸三葉因子[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

7 盧雅丕;董菁;周飛;王琳;張波;陳美婭;任建林;;人腸三葉因子酵母雙雜交載體的構(gòu)建及其自激活作用鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

8 江松福;蔡芳芳;莊強(qiáng);朱融和;梁彬;俞康;;腸三葉因子在腸道急性移植物抗宿主病中的動(dòng)態(tài)表達(dá)[A];2011年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)血液病分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地血液病研究2011高峰論壇暨國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育中西醫(yī)結(jié)合血液病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班文集[C];2011年

9 任建林;盧雅丕;陳建民;王琳;施華秀;葉震世;鐘燕;林遜汀;林輝;潘金水;劉明;;三葉因子1在胃癌及癌前病變胃粘膜中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)——2005年全國(guó)胃腸激素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

10 葛振華;周凡;武一曼;任彥;楊春波;柯曉;王若愚;;慢性胃炎脾氣虛證患者胃竇粘膜內(nèi)表皮生長(zhǎng)因子和三葉因子表達(dá)的意義[A];中醫(yī)藥學(xué)術(shù)發(fā)展大會(huì)論文集[C];2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李軍;腸三葉因子對(duì)內(nèi)毒素血癥幼鼠腸損傷的保護(hù)作用機(jī)制的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳國(guó)彬;微小RNA 423-5p調(diào)控三葉因子1基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞生物學(xué)行為影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 胡建紅;腸三葉因子減輕燒傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)腸上皮細(xì)胞谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 盧雅丕;人三葉因子1相互作用蛋白基因的篩選[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

4 江松福;天然人小腸三葉因子的提取及其生物活性的初步研究[D];浙江大學(xué);2002年

5 馬麗;胃癌組織中三葉因子2、三葉因子3的表達(dá)與細(xì)胞增殖和凋亡的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

6 王煥;重組人腸三葉因子對(duì)腸上皮細(xì)胞增殖移行能力的影響及其機(jī)制研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2012年

7 王逸娟;腸三葉因子對(duì)燒傷小鼠腸黏膜免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

8 石淑青;三葉因子Ⅰ和Ⅱ在胃癌和癌前病變的表達(dá)及意義[D];浙江大學(xué);2004年

9 李騰;重組人腸三葉因子對(duì)腸上皮細(xì)胞移行能力的影響及其機(jī)制研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2013年

10 榮芳;熱休克蛋白27、三葉因子Ⅱ在胃癌和癌前疾病中的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：918552