本文關(guān)鍵詞：印記基因（H19、Grb10）和miR-675對骨損傷愈合骨細(xì)胞增殖與分化的影響

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【摘要】：研究目的:印記基因?qū)τ诩?xì)胞代謝調(diào)節(jié)、胎兒生長發(fā)育、干細(xì)胞分化具有重要的作用。骨損傷愈合是局部骨再發(fā)育并涉及多因素高度復(fù)雜的生物學(xué)過程。骨損傷修復(fù)與印記基因以及micro RNA之間關(guān)系的研究很少。本研究通過檢測H19、miR-675、Grb10在骨愈合過程中的表達(dá)變化,探討骨愈合相關(guān)細(xì)胞和印記基因和微小RNA的關(guān)系。研究方法:30只大鼠左后肢股骨骨缺損造模,右后肢股骨假手術(shù),分別于5d、10d、15d、20d、25d斷頸法處死,每個時間點取6只,取左右后肢股骨分別作為實驗組和對照組,常規(guī)包埋,固定,切片。采用免疫組化染色觀察Grb10蛋白的表達(dá);采用免疫印跡測定Grb10蛋白表達(dá);采用實時熒光定量PCR測定H19、Grb10、miR-675的表達(dá)。研究結(jié)果:免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn):Grb10蛋白在實驗組5d和10d骨損傷愈合部位的表達(dá)量升高,平均光密度值顯示實驗組5d和10d蛋白表達(dá)量是對照組的兩倍。實時熒光定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn):H19、Grb10、miR-675在5d到25d實驗組和對照組中均有表達(dá);損傷后5d,實驗組H19表達(dá)量是對照組的兩倍,損傷后10d,實驗組H19表達(dá)量也是對照組的兩倍;損傷后15d、20d、25d實驗組和對照組的表達(dá)量基本持平;所有對照組miR-675表達(dá)基本一致,損傷后5d,實驗組miR-675表達(dá)量是對照組的2.5倍,損傷后10d,實驗組miR-675表達(dá)量升高,是對照組的3倍;15d、20d、25d、實驗組和對照組的表達(dá)量基本持平;損傷后5d實驗組Grb10的表達(dá)量是對照組的3倍,損傷后10d實驗組表達(dá)量下降,與對照組相比,是對照組的三倍。免疫印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn):Grb10蛋白在損傷后5d表達(dá)量比對照組表達(dá)量升高了兩倍,10d實驗組蛋白表達(dá)量下降,相對于對照組也升高了約兩倍,15d、20d、25d實驗組和對照組蛋白含量基本一致。研究結(jié)論:1)H19、Grb10和miR-675促進(jìn)骨細(xì)胞的增殖與分化,加速損傷的愈合進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：骨愈合 印記基因 H19 miR-675 Grb10
【學(xué)位授予單位】：武漢體育學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R683
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 1 引言9-11
• 2 文獻(xiàn)綜述11-23
• 2.1 骨愈合11-12
• 2.2 印記基因12-17
• 2.2.1 印記的建立、維持和消除13-14
• 2.2.2 印記基因的調(diào)控機制14-16
• 2.2.3 印記基因和生長發(fā)育16-17
• 2.3 H19和miR-67517-19
• 2.3.1 H19結(jié)構(gòu)17
• 2.3.2 H19印記調(diào)節(jié)17-18
• 2.3.3 H19基因功能18-19
• 2.4 miR-67519-20
• 2.5 Grb1020-23
• 2.5.1 Grb10結(jié)構(gòu)20
• 2.5.2 Grb10功能20-23
• 3 實驗材料和實驗方法23-31
• 3.1 實驗器材和主要的試劑23-26
• 3.1.1 實驗器材23-24
• 3.1.2 主要試劑24-26
• 3.2 實驗方法26-31
• 3.2.1 實驗動物分組26
• 3.2.2 實驗動物取材26-31
• 4 實驗結(jié)果31-41
• 4.1 實時熒光定量PCR31-36
• 4.1.1 不同時期實驗組和對照組H19 CT值情況見表 2-132-33
• 4.1.2 不同時期實驗組和對照組Mir675 CT值情況見表 2-233-34
• 4.1.3 不同時期實驗組和對照組Grb10 CT值情況見表 2-334-36
• 4.2 western blot36-37
• 4.2.1 Grb10蛋白在不同時期的表達(dá)36
• 4.2.2 Grb10蛋白表達(dá)情況見表 3-136-37
• 4.3 免疫組化37-41
• 4.3.1 Grb10在不同時期的表達(dá)37-38
• 4.3.2 Grb10平均光密度值見表 438-41
• 5 分析討論41-45
• 5.1 骨損傷愈合過程41
• 5.2 H19、miR-675與細(xì)胞分化41-43
• 5.3 Grb10與細(xì)胞增殖43-45
• 6 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-59
• 致謝59-60

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