本文關(guān)鍵詞：自體富血小板血漿對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ度損傷修復(fù)作用研究

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【摘要】：[目的]軟骨損傷在關(guān)節(jié)外科疾病中較為常見,未經(jīng)有效治療的關(guān)節(jié)軟骨損傷大多發(fā)展為骨性關(guān)節(jié)炎,后期出現(xiàn)關(guān)節(jié)生物力學(xué)改變、嚴(yán)重疼痛甚至畸形,導(dǎo)致功能障礙,加重患者心理或精神負(fù)擔(dān)。藥物保守治療及軟骨移植或關(guān)節(jié)鏡下微骨折鉆孔減壓等傳統(tǒng)的治療方法均未取得滿意效果。近年來(lái),隨著對(duì)自體富血小板血漿(platelet-rich plasma, PRP)作用機(jī)制研究領(lǐng)域的逐漸深入,自體富血小板血漿在骨科軟骨損傷修復(fù)中也取得了一定的療效。因其含有大量各種生長(zhǎng)因子對(duì)軟骨細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)合成具有促進(jìn)作用,成為了研究熱點(diǎn)。但國(guó)內(nèi)外對(duì)于自體富血小板血漿在關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ度損傷中的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兔自體富血小板血漿對(duì)膝關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ度損傷模型中軟骨修復(fù)程度的變化,來(lái)比較不同分組之間術(shù)后膝關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)程度的區(qū)別,為臨床提供理論依據(jù)與指導(dǎo)意見。[方法]1.分組：選取36只健康新西蘭大白兔作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,隨機(jī)分為PRP組、透明質(zhì)酸鈉組(hyaluronic acid, HA)和生理鹽水組(normal saline, NS),每組12只。三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于手術(shù)后12周處死；2.采血：用含有肝素鈉抗凝劑的真空采血管對(duì)每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行耳中央動(dòng)脈采血8ml,另外用含EDTA-K2抗凝劑的真空采血管采血2ml；3.離心：應(yīng)用二次離心法制備PRP,配平后進(jìn)行第一次離心,轉(zhuǎn)速2000r/min,時(shí)間10min,離心后用注射器吸取交界層以下2mm的紅細(xì)胞并棄去,剩余部分放入離心機(jī)中配平后進(jìn)行第二次離心,轉(zhuǎn)速2000r/min,時(shí)間10min,離心后用注射器吸取血清層的上方3/4部分并棄去,剩余部分即為PRP。8ml兔動(dòng)脈血可制備約0.8mlPRP;4.血小板計(jì)數(shù)：將采血時(shí)得到的EDTA-K2抗凝的2ml血液以及制成的PRP放入血細(xì)胞分析儀中進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)；5.軟骨損傷造模及干預(yù)：每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均采用膝前正中切口切開膝關(guān)節(jié)前方皮膚后以髕旁內(nèi)側(cè)入路切開膝關(guān)節(jié)囊,充分暴露兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)髁后用克氏針束在其內(nèi)側(cè)髁正中部位制造Ⅱ度的軟骨損傷模型(面積約2×3mm2、深度約0.3mmm),然后,PRP組向左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入之前制備的0.8ml PRP及50ul激活劑(葡萄糖酸鈣、牛凝血酶),HA組向左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入0.8ml透明質(zhì)酸鈉,NS組左膝注入0.8ml生理鹽水。術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均不予以制動(dòng)；6.觀察結(jié)果：空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后,切開左膝關(guān)節(jié)囊暴露軟骨損傷部位進(jìn)行大體觀察,并應(yīng)用國(guó)際軟骨修復(fù)協(xié)會(huì)(International Cartilage Repair Society, ICRS)對(duì)其進(jìn)行大體評(píng)分,之后對(duì)損傷修復(fù)部位進(jìn)行取材制成組織切片并行HE染色、番紅-O染色及免疫組織化學(xué)染色,對(duì)其進(jìn)行顯微鏡下觀察并應(yīng)用奧德里斯科爾組織學(xué)評(píng)分(O' Driscoll histological score)對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于免疫組織化學(xué)染色結(jié)果運(yùn)用IPP(Image-Pro Plus, IPP)6.0圖像分析軟件對(duì)Ⅱ型膠原蛋白免疫組織化學(xué)染色的平均光密度值進(jìn)行測(cè)量。[結(jié)果]在術(shù)后12周時(shí)組與組之間可見顯著差異,RPP組損傷區(qū)域表面修復(fù)較好,表面較平滑、光整；HA組仍可見損傷痕跡；NS組損傷區(qū)域修復(fù)較差,表面粗糙、凹凸不平。HE染色可見PRP組新生組織與正常軟骨組織從細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分布及細(xì)胞外基質(zhì)分布方面都相似,軟骨細(xì)胞增生較多；HA組新生軟骨細(xì)胞量較PRP組少；NS組新生軟骨細(xì)胞量最少,新生組織與正常軟骨組織從細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞分布及細(xì)胞外基質(zhì)分布方面有明顯差異。番紅-O染色也可見PRP組損傷區(qū)域和周圍正常區(qū)域相似；HA組有大量番紅-O著色的軟骨基質(zhì),軟骨細(xì)胞增殖旺盛；NS組的軟骨細(xì)胞增生量相對(duì)較少,且多為成纖維細(xì)胞。免疫組織化學(xué)染色見PRP組損傷區(qū)域有大量的Ⅱ型膠原蛋白,損傷修復(fù)區(qū)域與正常組織之間未見明顯區(qū)分；HA組免疫組織化學(xué)染色切片觀察見軟骨損傷區(qū)域表面缺乏Ⅱ型膠原蛋白,而軟骨表層下可見少量Ⅱ型膠原蛋白；NS組免疫組織化學(xué)染色切片觀察見損傷修復(fù)區(qū)域由少量Ⅱ型膠原蛋白和大量肉芽組織填充,見明顯Ⅱ型膠原蛋白免疫組織化學(xué)淡染區(qū),損傷修復(fù)區(qū)域與正常組織之間分界線比較明顯。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,三組之間應(yīng)用單因素方差分析(Analysis of variance, ANOVA),每?jī)山M之間進(jìn)行比較應(yīng)用LSD-t檢驗(yàn)(least significant difference-t, LSD-t)。三組之間大體觀察ANOVA結(jié)果顯示：F=9.252,P=0.01(P0.05),每?jī)山M之間比較的LSD-t結(jié)果均為P0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；三組之間HE染色和番紅-O染色的顯微鏡下觀察ANOVA結(jié)果顯示：F=9.157,P=0.01(P0.05),每?jī)山M之間比較的LSD-t結(jié)果均為P0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；三組之間免疫組織化學(xué)染色的平均光密度ANOVA結(jié)果顯示：F=9.480,P=0.01(P0.05),每?jī)山M之間比較比較的LSD-t結(jié)果均為P0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)論]通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)：1.PRP對(duì)軟骨修復(fù)有著積極的促進(jìn)作用,可促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨損傷后的修復(fù)速度,并且能刺激軟骨細(xì)胞再生基質(zhì)形成,使其恢復(fù)原有的組織形態(tài)與結(jié)構(gòu),提高軟骨損傷的修復(fù)效果；2.PRP與HA對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷均有修復(fù)作用,但PRP對(duì)軟骨的修復(fù)效果優(yōu)于HA;3.PRP對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ度損傷的修復(fù)效果較好,可為臨床提供指導(dǎo)意見。
【關(guān)鍵詞】：富血小板血漿 軟骨修復(fù) 軟骨細(xì)胞 軟骨損傷 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-18
• 材料與方法18-25
• 結(jié)果25-28
• 附表28-32
• 附圖32-47
• 討論47-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 綜述61-69
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果69-70
• 致謝70-71

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