本文關(guān)鍵詞：甲氨蝶呤通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑預(yù)防膝關(guān)節(jié)術(shù)后瘢痕粘連的實驗研究

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【摘要】：目的：探討局部應(yīng)用不同濃度的甲氨蝶呤(MTX)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡及其預(yù)防膝關(guān)節(jié)術(shù)后瘢痕粘連的作用,并研究其可能機制。方法：將18只成年新西蘭大兔平均三組,分別是2 mg/ml組、1 mg/ml組和生理鹽水對照組。耳緣靜脈注射質(zhì)量百分比為2%的戊巴比妥鈉麻醉后,備皮、消毒術(shù)區(qū),打開膝關(guān)節(jié)后,用電鉆在股骨內(nèi)外側(cè)髁制成約10mm×10mm的骨缺損區(qū),將對應(yīng)的不同濃度的MTX和生理鹽水應(yīng)用于骨缺損區(qū),術(shù)后常規(guī)消毒和抗生素治療3天,并用克氏針固定在完全屈曲的位置4周。4周后將兔子處理后,瘢痕組織制成標(biāo)本,行HE染色和Masson染色觀察MTX預(yù)防膝關(guān)節(jié)疤痕粘連的效果以及免疫組織化學(xué)法檢測膝關(guān)節(jié)瘢痕中CHOP的表達(dá)量的變化。體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,以不同濃度的MTX處理24h后,CCK-8檢測成纖維細(xì)胞的活力變化,Hoechst33342染色法觀察應(yīng)用MTX處理對成纖維細(xì)胞凋亡的影響。Western-blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況,如cleaved PARP、CHOP、Bcl-2、 Bax。結(jié)果：本實驗中所有的動物未發(fā)生死亡、皮膚壞死、膝關(guān)節(jié)感染等現(xiàn)象,恢復(fù)情況良好。HE染色結(jié)果：2 mg/ml MTX組和1 mg/ml MTX組瘢痕中成纖維細(xì)胞數(shù)量小于對照組瘢痕組織中的數(shù)量(P0.05),而2 mg/ml MTX組瘢痕中成纖維細(xì)胞數(shù)量也小于1 mg/ml MTX組瘢痕中數(shù)量,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Masson染色觀察的結(jié)果：對照組兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)可見致密的瘢痕組織、大量的膠原和成纖維細(xì)胞沉積,而實驗組中瘢痕組織明顯減少,膠原含量明顯降低,且2 mg/ml MTX組較1 mg/mlMTX組瘢痕組織及膠原含量更低,Image Pro Plus分析后可知膠原密度隨著濃度的增加而逐漸降低,各組間的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果以Image Pro Plus分析后顯示2 mg/ml MTX組瘢痕組織中CHOP的表達(dá)量明顯高于1 mg/ml MTX組和對照組中CHOP的表達(dá)量(P0.05)；而1 mg/mlMTX組瘢痕中CHOP的表達(dá)量明顯高于對照組的中CHOP的表達(dá)量(P0.05),表明CHOP表達(dá)隨著濃度的增高而升高,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑可能參與了MTX的作用過程。體外細(xì)胞實驗顯示MTX能有效抑制成纖維細(xì)胞的增殖和活力,呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴的趨勢,Hoechst染色發(fā)現(xiàn)MTX處理組的凋亡細(xì)胞明顯多于對照組。Western-blot結(jié)果顯示MTX處理后的成纖維細(xì)胞隨著時間延長,cleaved-PARP的表達(dá)量增高,同時CHOP、bax的表達(dá)量升高,而bcl-2的表達(dá)量降低,說明MTX可以抑制成纖維細(xì)胞活力,誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑參與其中。結(jié)論：MTX能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡,預(yù)防兔膝關(guān)節(jié)瘢痕粘連。
【關(guān)鍵詞】：瘢痕粘連 甲氨蝶呤 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R687.4
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 符號說明7-8
• 前言8-10
• 參考文獻(xiàn)9-10
• 材料與試劑10-13
• 實驗方法13-18
• 結(jié)果18-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 綜述29-37
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 致謝37-38
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄38-39

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本文編號：801468