本文關(guān)鍵詞：骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞研究

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【摘要】：研究背景：骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis, OA)是最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)疾病之一,它的顯著病理特征是進(jìn)展性的關(guān)節(jié)軟骨破壞,從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛和活動(dòng)受限,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是來(lái)源于間質(zhì)組織，具有增值和多向分化能力的細(xì)胞,廣泛參與體內(nèi)損傷修復(fù)過(guò)程。既往有研究發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)液中含有間充質(zhì)干細(xì)胞,而且早期骨關(guān)節(jié)炎比正常人的關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量會(huì)有所增加。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)于研究骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制及治療方法有著重要的意義,但是這些研究也存在一定的局限性,例如他們使用的檢測(cè)方法還不夠敏感和精確。因此,我們希望通過(guò)本研究來(lái)分離培養(yǎng)和鑒定人關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞,基于Flowsight(?)圖像流式細(xì)胞技術(shù),比較早期和晚期骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞比例的差異。方法：(1)取人關(guān)節(jié)液后,采用貼壁法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),鏡下觀察關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)。5%C02、37℃恒溫箱中培養(yǎng)28天,至細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶底后,使用PE-CD44、FITC-CD90、APC-CD73、PerCP-Cy5.5-CD105、eFluor450-CD34、APC-eFluor 780-CD45這6種熒光抗體標(biāo)記細(xì)胞,應(yīng)用FlowSight(?)流式細(xì)胞儀鑒定關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞,并觀察其單細(xì)胞形態(tài)和熒光染色情況。(2)根據(jù)患者術(shù)前下肢全長(zhǎng)和膝關(guān)節(jié)側(cè)位X線片,依據(jù)骨關(guān)節(jié)炎的Kellgren與Lawrence (K-L)影像學(xué)分期方法,將患者分為早期OA組(17例)和晚期OA組(26例)。取患者的關(guān)節(jié)液后,一半關(guān)節(jié)液不經(jīng)過(guò)培養(yǎng),直接使用圖像流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞的比例；另一半關(guān)節(jié)液進(jìn)行分離培養(yǎng),28天后檢測(cè)關(guān)節(jié)液中間充質(zhì)干細(xì)胞的比例,評(píng)估關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞比例與膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎影像學(xué)分期及其他因素的相關(guān)性。結(jié)果：關(guān)節(jié)液中的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后,顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈紡錘形,有集落形成,符合間充質(zhì)干細(xì)胞的外觀特征。圖像流式細(xì)胞儀中可見(jiàn)分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞的單細(xì)胞圖像和熒光染色照片,關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞在表面標(biāo)志物中表達(dá)CD44、CD90、CD73、CD105,不表達(dá)CD34和CD45。新鮮的關(guān)節(jié)液中,晚期OA組SF-MSCs占總細(xì)胞的比例高于早期OA組(2.05±0.64 vs3.18%±0.92，P0.01)。細(xì)胞培養(yǎng)后,兩組SF-MSCs的比例仍有差異(47.15%±14.36 vs 57.64±10.84,P0.01)。SF-MSC比例與年齡、BMI、HSS評(píng)分等因素?zé)o相關(guān)性。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了關(guān)節(jié)液中存在間充質(zhì)干細(xì)胞,且首次運(yùn)用多通道圖像流式細(xì)胞技術(shù),更加直觀、準(zhǔn)確地鑒定了間充質(zhì)干細(xì)胞。骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞比例與骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展程度具有相關(guān)性,原因可能是軟骨自身修復(fù)和愈合的反應(yīng)在晚期骨關(guān)節(jié)炎中更為活躍。
【關(guān)鍵詞】：關(guān)節(jié)液 間充質(zhì)干細(xì)胞 圖像流式細(xì)胞技術(shù) 骨關(guān)節(jié)炎 影像學(xué)分期
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 第一部分 人關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定11-21
• 材料和方法11-14
• 結(jié)果14-20
• 討論20-21
• 第二部分 關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞與骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究21-28
• 材料和方法21-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 文獻(xiàn)綜述32-40
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 縮略詞對(duì)照表40-41
• 發(fā)表文章41-42
• 致謝42

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本文編號(hào)：779340