發(fā)布時(shí)間：2017-08-30 11:45

  本文關(guān)鍵詞：生物電紡技術(shù)的研發(fā)及組織工程骨的構(gòu)建

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)一骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及成骨分化能力的研究目的:體外獲取人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、純化、擴(kuò)增,同時(shí)探討其生物學(xué)特性及成骨分化能力。方法:全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察其增殖、生長特性和組織學(xué)形態(tài);流式細(xì)胞術(shù)檢測第4代細(xì)胞表面抗原CD44、CD90、CD105、CD73、CD34、CD45、HLA-DR的表達(dá)情況;向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化,分別采用茜素紅染色、堿性磷酸酶染色及Ⅰ型膠免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定其分化成骨的能力。結(jié)果:貼壁的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為紡錘形,呈克隆樣生長,性狀穩(wěn)定,具有較強(qiáng)的增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)檢測第4代細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD90、CD105、CD73,不表達(dá)CD34、CD45、HLA-DR。經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后,茜素紅染色、堿性磷酸酶染色、Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽性。結(jié)論:人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離提取操作簡便易行,且有較強(qiáng)的生長增殖能力,在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以向成骨細(xì)胞分化,并能夠穩(wěn)定表達(dá)成骨細(xì)胞特異表型。實(shí)驗(yàn)二人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合P3HB4HB/PVA納米仿生纖維體內(nèi)異位成骨能力的研究目的:探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合P3HB4HB/PVA納米仿生三維支架體外成骨誘導(dǎo)后植入裸鼠體內(nèi)異位構(gòu)建組織工程化骨的能力。方法:利用同軸電紡技術(shù)制作P3HB4HB/PVA納米仿生三維支架,取第4代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以2×107/ml的密度接種在納米仿生三維支架上,分誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組。掃描電鏡和透射電鏡觀察三維支架的微觀結(jié)構(gòu),接觸角測定材料的親水性,熒光染色和DAPI染色觀察細(xì)胞在三維支架上的生長情況。誘導(dǎo)組細(xì)胞-支架復(fù)合物在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)2周后植入裸鼠背部皮下,未誘導(dǎo)組細(xì)胞-支架復(fù)合物在完全培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)2周后植入裸鼠背部皮下。觀察細(xì)胞-支架復(fù)合物在裸鼠皮下的形態(tài)變化。分別于8周和16周取材行HE染色、茜素紅染色、Von Kossa染色、馬松三色染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色。結(jié)果:同軸電紡制備的納米仿生三維支架表現(xiàn)出良好的親水性和細(xì)胞吸附性。掃描電鏡見納米纖維連續(xù)、均一,細(xì)胞在纖維上粘附、生長。透射電鏡可見納米纖維的芯殼結(jié)構(gòu)。測量得同軸電紡的P3HB4HB/PVA復(fù)合纖維膜接觸角小于單純的P3HB4HB纖維膜,親水性更佳,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。熒光染色和DAPI染色結(jié)果顯示細(xì)胞可在支架上粘附、增殖。細(xì)胞-支架復(fù)合物植入裸鼠體內(nèi),裸鼠生存狀態(tài)良好,誘導(dǎo)組復(fù)合物大小形態(tài)基本保持原狀,質(zhì)地變硬;未誘導(dǎo)組逐漸縮小至完全降解。8周和16周時(shí)誘導(dǎo)組HE染色、茜素紅染色、Von Kossa染色、馬松三色染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色檢測均呈陽性。未誘導(dǎo)組均呈陰性。結(jié)論:人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合P3HB4HB/PVA納米仿生三維支架經(jīng)體外成骨誘導(dǎo)后,初步具有在裸鼠體內(nèi)異位構(gòu)建組織工程化骨的能力,但支架材料的降解需要進(jìn)一步調(diào)控。實(shí)驗(yàn)三生物電紡P3HB4HB/PVA-h BMSCs復(fù)合物體內(nèi)異位成骨能力的研究目的:利用同軸電紡技術(shù),一次成型細(xì)胞-支架復(fù)合物。探討P3HB4HB/PVA-h BMSCs復(fù)合物在體內(nèi)構(gòu)建組織工程化骨的能力。方法:采用同軸電紡技術(shù)制備出芯為P3HB4HB,殼為PVA與人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞混合液的一次成型復(fù)合物,分誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組。掃描電鏡、熒光染色、DAPI染色觀察復(fù)合物微觀結(jié)構(gòu)及細(xì)胞黏附、增殖情況。誘導(dǎo)組細(xì)胞-支架復(fù)合物在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)2周后植入裸鼠背部皮下,未誘導(dǎo)組細(xì)胞-支架復(fù)合物在完全培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)2周后植入裸鼠背部皮下。觀察細(xì)胞-支架復(fù)合物在裸鼠皮下的形態(tài)變化。分別于8周和16周取材行HE染色、茜素紅染色、Von Kossa染色、馬松三色染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色。結(jié)果:掃描電鏡見細(xì)胞在纖維上粘附和生長,并分泌大量基質(zhì)。熒光染色和DAPI染色結(jié)果均顯示細(xì)胞大量、均勻的種植在支架上。細(xì)胞-支架復(fù)合物植入裸鼠體內(nèi),裸鼠生存狀態(tài)良好,誘導(dǎo)組復(fù)合物大小形態(tài)基本保持原狀,質(zhì)地變硬;未誘導(dǎo)組逐漸縮小至完全降解。8周和16周時(shí)誘導(dǎo)組HE染色、茜素紅染色、Von Kossa染色、馬松三色染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色檢測均呈陽性。未誘導(dǎo)組均呈陰性。結(jié)論:同軸電紡一次成型構(gòu)建的P3HB4HB/PVA-h BMSCs復(fù)合物,經(jīng)體外成骨誘導(dǎo)后初步具有在裸鼠體內(nèi)異位構(gòu)建組織工程化骨的能力。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 成骨誘導(dǎo) 同軸電紡 生物電紡 P3HB4HB 組織工程 異位成骨
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R318.08;R68
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 略縮詞表11-12
• 引言12-15
• 實(shí)驗(yàn)一 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及成骨分化能力的研究15-22
• 材料與方法15-18
• 結(jié)果18-19
• 討論19-20
• 附圖20-22
• 實(shí)驗(yàn)二 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合P3HB4HB/PVA納米仿生纖維體內(nèi)異位成骨能力的研究22-35
• 材料與方法22-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-30
• 附圖30-35
• 實(shí)驗(yàn)三 生物電紡P3HB4HB/PVA-hBMSCs復(fù)合物體內(nèi)異位成骨能力的研究35-47
• 材料與方法35-37
• 結(jié)果37-39
• 討論39-43
• 附圖43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 作者簡歷63-65
• 致謝65-66
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集66

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本文編號：759131