本文關(guān)鍵詞：17β-雌二醇對骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞mTOR信號通路影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 17β-雌二醇 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 軟骨細(xì)胞 AKT和非AKT依賴途徑

【摘要】：目的:研究17β-雌二醇(E2)是否可以激活人軟骨細(xì)胞中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路,以及如何激活或通過什么樣的途徑激活mTOR信號通路。通過對這一新的分子機(jī)制的探索可能揭示雌二醇對人軟骨細(xì)胞的生理作用。我們的研究可能為mTOR作為OA治療的潛在靶點(diǎn)提供依據(jù)及對mTOR有效的抑制劑的研究提供參考。方法:對人永生化軟骨細(xì)胞細(xì)胞系TC28a2和C28/I2E2在雷帕霉素(mTOR抑制劑)、E2、LY294002(PI3K抑制劑)、或E2與雷帕霉素或LY294002等聯(lián)合治療條件下進(jìn)行孵育。然后,對S6K1、p-S6K1蛋白、蛋白激酶B(AKT),和p-AKT的蛋白水平進(jìn)行Western blot分析,MMP3或MMP13的mRNA水平進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)、免疫共沉淀(CO-IP)和蛋白質(zhì)印跡法(WB)分析以驗(yàn)證雌激素受體α和mTOR信號通路之間的相互作用。結(jié)果:p-S6K1和p-AKT(半小時(shí)和一小時(shí))在與E2一起培養(yǎng)的細(xì)胞系TC28a2和C28/12E2中均明顯升高。mTOR不影響p-AKT的水平,但當(dāng)與LY294002(PI3K抑制劑)、或E2與LY294002組合的條件下培養(yǎng),其水平明顯減少。當(dāng)與LY294002一起培養(yǎng)的條件下p-S6K1水平明顯減少,但這種影響可由E2與LY294002組合條件下逆轉(zhuǎn)。在與E2一起培養(yǎng)的條件下兔抗mTOR抗體可以與ERα發(fā)生共沉淀反應(yīng)。另外,E2可以通過mTOR信號通道抑制MMP3和MMP13的mRNA水平。結(jié)論:17β-雌二醇可激活人軟骨細(xì)胞mTOR信號通路,其是通過AKT依賴性及非依賴性途徑激活人軟骨細(xì)胞中mTOR信號通路的。
【關(guān)鍵詞】：17β-雌二醇 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 軟骨細(xì)胞 AKT和非AKT依賴途徑
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用縮寫詞中英文對照表9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-16
• 1.主要實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器、設(shè)備11-13
• 2.實(shí)驗(yàn)方法13-16
• 結(jié)果16-19
• 討論19-21
• 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-26
• 綜述26-43
• 參考文獻(xiàn)35-43
• 致謝43-44
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果44-45
• 個(gè)人簡歷45

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