發(fā)布時(shí)間：2017-08-14 14:11

  本文關(guān)鍵詞：嗎啡預(yù)處理通過調(diào)控miR-133b-5p減輕心肌細(xì)胞缺氧再給氧損傷的作用及機(jī)制

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【摘要】：背景micro RNAs(mi RNAs)是一類新型非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),參與各種病理生理過程。已報(bào)道m(xù)i RNA可以參與調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡、心肌梗死、心肌重塑、心肌缺血再灌注損傷、藥物預(yù)處理等過程。本課題組前期利用mi RNA芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)mi R-133b-5p在心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞中表達(dá)量明顯降低,而經(jīng)歷嗎啡預(yù)處理(morphine preconditioning,MPC)后,mi R-133b-5p水平顯著升高。本課題擬在前期研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究mi R-133b-5p介導(dǎo)MPC心肌細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)的作用及機(jī)制。方法1.mi R-133b-5p inhibitor轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證。對數(shù)期生長的H9c2心肌細(xì)胞長至40-50%細(xì)胞融合度時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor(FAM標(biāo)記),48 h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞占總細(xì)胞的比例,q RT-PCR驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)mi R-133b-5p下降水平。2.mi R-133b-5p在心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制。對數(shù)期生長的H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為3組:正常對照組(CON)、抑制劑組(mi R-133b-5p inhibitor)、抑制劑對照組(inhibitor-NC)。CON正常培養(yǎng),mi R-133b-5p inhibitor在細(xì)胞長至40-50%融合度時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor,inhibitor-NC在細(xì)胞長至40-50%融合度時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor-NC。48 h后收集培養(yǎng)液上清檢測乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,收集細(xì)胞利用流式細(xì)胞儀檢測心肌細(xì)胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot檢測各組凋亡相關(guān)分子Fas的表達(dá)情況。3.mi R-133b-5p在嗎啡預(yù)處理減輕心肌細(xì)胞缺氧再給氧損傷中的作用及其機(jī)制。對數(shù)期生長的H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為5組:正常對照組(CON)、缺氧再給氧組(hypoxia/reoxygenation,H/R)、嗎啡預(yù)處理組(MPC)、嗎啡預(yù)處理+抑制劑組(MPC+mi R-133b-5p inhibitor)、嗎啡預(yù)處理+抑制劑對照組(MPC+inhibitor-NC)。CON細(xì)胞正常培養(yǎng)。H/R細(xì)胞給予缺氧5h、復(fù)氧1h處理。MPC細(xì)胞在H/R之前給予1mmol/L嗎啡預(yù)處理10 min。MPC+mi R-133b-5p inhibitor細(xì)胞在嗎啡預(yù)處理前24 h轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor。MPC+inhibitor-NC細(xì)胞在嗎啡預(yù)處理前24 h轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor。吸取各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清檢測LDH活性,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(cell counting kit-8,CCK-8)檢測心肌細(xì)胞活力,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot檢測各組凋亡相關(guān)分子Fas的表達(dá)情況。結(jié)果1.mi R-133b-5p inhibitor轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證。H9c2心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor(FAM標(biāo)記)48后,熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)大于80%的細(xì)胞帶有綠色熒光標(biāo)記,q RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-133b-5p inhibitor后mi R-133b-5p表達(dá)水平明顯降低,即轉(zhuǎn)染效率滿意。2.mi R-133b-5p在心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制。與CON組相比,mi R-133b-5p inhibitor組細(xì)胞mi R-133b-5p表達(dá)明顯下降,培養(yǎng)液LDH活性增多,細(xì)胞凋亡率升高(P0.05),而inhibitor-NC組細(xì)胞mi R-133b-5p表達(dá)、LDH活性、細(xì)胞凋亡率變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與CON組相比,mi R-133b-5p inhibitor組細(xì)胞Fas m RNA與Fas蛋白表達(dá)增加(P0.05),而inhibitor-NC組Fas表達(dá)無明顯變化。3.mi R-133b-5p在嗎啡預(yù)處理減輕心肌細(xì)胞缺氧再給氧損傷中的作用及其機(jī)制。與CON相比,H/R、MPC MPC+mi R-133b-5p inhibitor和MPC+inhibitor-NC組細(xì)胞活力下降,LDH水平增加,凋亡率增加,mi R-133b-5p表達(dá)下調(diào)(P0.05)。與H/R組相比,MPC組mi R-133b-5p表達(dá)明顯上調(diào),細(xì)胞活力增加,LDH水平減少,細(xì)胞凋亡率減少,Fas表達(dá)下調(diào)(P0.05)。與MPC組相比,MPC+mi R-133b-5p inhibitor組mi R-133b-5p表達(dá)明顯下調(diào),細(xì)胞活力降低,LDH水平增加,細(xì)胞凋亡率增加,Fas表達(dá)上調(diào)(P0.05),而MPC+inhibitor-NC組mi R-133b-5p表達(dá)、細(xì)胞活力、LDH水平、細(xì)胞凋亡率、Fas表達(dá)變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論嗎啡預(yù)處理可能通過上調(diào)mi R-133b-5p,進(jìn)一步抑制靶基因Fas m RNA和蛋白表達(dá)水平,從而減輕心肌細(xì)胞缺血再灌注缺氧再給氧損傷。
【關(guān)鍵詞】：心肌細(xì)胞 微小 RNAs 凋亡 缺氧再給氧損傷 嗎啡預(yù)處理
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 1.引言12-14
• 2. 材料與方法14-31
• 3. 結(jié)果31-44
• 4. 討論44-47
• 5. 結(jié)論47-48
• 6. 參考文獻(xiàn)48-51
• 附錄51-53
• 致謝53-54
• 綜述54-66
• 參考文獻(xiàn)63-66

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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9 陳t跨，

本文編號：673052