本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB調(diào)控netrin-1表達(dá)的研究

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【摘要】：創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury,TBI)是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,它是由于外界機(jī)械性損傷造成,產(chǎn)生原發(fā)性損傷,隨后原發(fā)性損傷引起的一系列機(jī)體生化反應(yīng)進(jìn)而產(chǎn)生繼發(fā)性損傷。雖然隨著時(shí)間的推移,損傷周?chē)饾u恢復(fù),形成膠質(zhì)瘢痕,但由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺乏修復(fù)能力,故損傷部位存在神經(jīng)功能下降。為了降低繼發(fā)性損傷對(duì)機(jī)體的損害,促進(jìn)損傷組織的修復(fù),對(duì)于創(chuàng)傷性腦損傷機(jī)理的研究就顯得尤為重要。神經(jīng)元遭到損傷,星形膠質(zhì)細(xì)胞受到刺激,迅速活化分裂增殖,樹(shù)突增多,成為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子(netrin-1),屬于層粘連蛋白,在細(xì)胞遷移過(guò)程發(fā)揮重要作用。核因子-κB(nulear factor-κb,NF-κB),是細(xì)胞中重要的信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白,在腦損傷后反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞中被激活,其p50/p65二聚體活性位點(diǎn)得以暴露,轉(zhuǎn)入細(xì)胞核中,啟動(dòng)下游基因轉(zhuǎn)錄,p50/p65二聚體中p65是啟動(dòng)相關(guān)反應(yīng)的關(guān)鍵蛋白。有相關(guān)研究證明,由炎性腸炎發(fā)展成直腸癌的病人體內(nèi),其NF-κB激活水平與netrin-1表達(dá)上調(diào)水平呈正相關(guān),但是NF-κB與netrin-1之間關(guān)系在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中鮮有報(bào)道,尤其當(dāng)中樞神經(jīng)受到損傷,netrin-1與NF-κB信號(hào)通路之間關(guān)系目前尚不清楚。故本實(shí)驗(yàn)旨在建立大鼠腦損傷模型及體外細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),探討netrin-1和NF-κB在腦損傷神經(jīng)修復(fù)中的可能作用。第一部分大鼠腦損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞netrin-1與NF-κB通路的關(guān)系目的通過(guò)建立大鼠腦損傷模型,研究星形膠質(zhì)細(xì)胞netrin-1與NF-κB通路的關(guān)系,探討其對(duì)神經(jīng)損傷修復(fù)的可能作用。方法建立大鼠腦損傷模型,分別于損傷后12 h,1 d,2 d,3 d,1 w,2 w,3 w,5 w,7w,應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)損傷皮層區(qū)域不同時(shí)間段netrin-1,GFAP及NF-κB的表達(dá)變化,選取netrin-1表達(dá)量最高的時(shí)間點(diǎn),利用免疫組化熒光標(biāo)記觀察形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果隨著損傷時(shí)間的推移,損傷皮層附近的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,Western blot結(jié)果顯示損傷部位GFAP及netrin-1表達(dá)逐漸增加,核內(nèi)蛋白抽提物中p65亦逐漸上升,并于損傷兩周達(dá)到高峰,隨后下降。免疫組化熒光染色檢測(cè)可見(jiàn),損傷2周后,大鼠腦皮層損傷區(qū)域星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性肥大,netrin-1表達(dá)水平增加,p65在核內(nèi)表達(dá)增多;損傷附近區(qū)域,p65核轉(zhuǎn)位明顯增多,netrin-1表達(dá)升高。結(jié)論在大鼠腦損傷模型中,隨著損傷時(shí)間推移,netrin-1表達(dá)變化與p65核轉(zhuǎn)位具有一定關(guān)聯(lián)性,可能共同參與中樞神經(jīng)損傷修復(fù)過(guò)程。第二部分NF-κB抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移影響目的研究NF-κB抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響。方法建立劃痕損傷模型,分為實(shí)驗(yàn)組(NF-κB抑制劑PDTC組,5?g/ml)及對(duì)照組,損傷后12h、24h、48h、72h,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞遷移情況,應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)netrin-1、GFAP及p65表達(dá)變化。結(jié)果在劃痕損傷后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移速度緩慢,可見(jiàn)較為清晰的損傷邊界;而對(duì)照組隨著時(shí)間推移,遷移變化明顯,損傷邊界漸模糊,并漸呈融合現(xiàn)象。Western blot技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組GFAP及netrin-1表達(dá)與核p65表達(dá)變化呈現(xiàn)相似趨勢(shì)。結(jié)論NF-κB抑制劑PDTC抑制損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移,不利于修復(fù)劃痕損傷;并且,netrin-1及GFAP表達(dá)與p65核轉(zhuǎn)位在實(shí)驗(yàn)組中均呈現(xiàn)減弱趨勢(shì),提示星形膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB調(diào)控netrin-1表達(dá)可能參與腦損傷后神經(jīng)修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：腦損傷 星形膠質(zhì)細(xì)胞 netrin-1 NF-κB 大鼠 NF-κB netrin-1 PDTC 星形膠質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分 SD大鼠腦損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞NETRIN-1 與NF-ΚB通路的關(guān)系14-34
• 材料和方法14-19
• 結(jié)果19-29
• 討論29-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 第二部分 NF-ΚB抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)遷移的影響34-45
• 材料與方法34-37
• 結(jié)果37-42
• 討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 結(jié)論45-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 縮略詞表(ABBREVIATION)55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表論文56-57
• 致謝57-58

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本文編號(hào)：654731