本文關(guān)鍵詞：骨肉瘤患者組織標(biāo)本間的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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【摘要】：目的:骨肉瘤是原發(fā)于骨髓的高度惡性腫瘤,是一種間葉組織來源的惡性腫瘤,其特征是增殖的腫瘤細(xì)胞直接形成骨或骨樣組織。骨肉瘤好發(fā)于10~20歲的青少年,目前局部發(fā)病未發(fā)生轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者接受手術(shù)治療及新輔助化療后5年生存率可達(dá)到60%-70%。然而其病程短且進(jìn)展快,早期即可出現(xiàn)轉(zhuǎn)移,最常經(jīng)血行轉(zhuǎn)移至肺。因大多數(shù)骨肉瘤患者癥狀隱匿,有些患者初診較晚,就診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移,這類患者即使接受新輔助化療,其對(duì)化療藥物會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的耐藥性,其5年生存率只有20-40%左右,預(yù)后較差。比較蛋白質(zhì)組學(xué)探索不同時(shí)期、不同組織、不同狀態(tài)或不同外界條件作用下細(xì)胞或生物體的蛋白質(zhì)表達(dá)變化的相關(guān)信息,可以明確重要生理及病理體系差異蛋白質(zhì)的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其異常的原因。其技術(shù)的發(fā)展使得高通量篩選不同類型的腫瘤或正常組織的差異蛋白質(zhì)成為可能,差異表達(dá)蛋白質(zhì)的分析鑒定為腫瘤分子標(biāo)記物及新藥物治療分子靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)奠定了基礎(chǔ),為我們更有利于了解生命活動(dòng)規(guī)律提供了幫助。本課題比較早期發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤與早期沒有發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤間的差異表達(dá)蛋白質(zhì),在蛋白質(zhì)水平探查骨肉瘤發(fā)生發(fā)展、耐藥及轉(zhuǎn)移機(jī)制,為骨肉瘤的早期診斷、預(yù)后判斷和個(gè)性化治療等提供依據(jù)。方法:收集2014年1月至2016年1月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院骨與軟組織腫瘤科確診并通過手術(shù)切除的骨肉瘤標(biāo)本6例,其中分為發(fā)病1年內(nèi)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的3例(Ⅰ組)和發(fā)病1年內(nèi)沒有發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的3例(Ⅱ組),利用TCA-丙酮沉淀法分別對(duì)收集的Ⅰ組和Ⅱ組樣品提取總蛋白,各組混合后再由胰酶對(duì)各組總蛋白質(zhì)進(jìn)行消化為多肽。以不同i TRAQ試劑盒對(duì)各組總蛋白消化得到的肽段分別進(jìn)行標(biāo)記,將混合肽段用強(qiáng)陽離子交換柱和C18反向柱進(jìn)行分級(jí)分離,采用液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜檢測技術(shù)進(jìn)行鑒定,數(shù)據(jù)結(jié)果經(jīng)Mascot檢索軟件在Uniprot_human數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索,得到兩組樣本的總蛋白譜和差異蛋白相對(duì)定量定性結(jié)果。我們對(duì)所得數(shù)據(jù)以閾值(差異倍數(shù)大于1.5,p值小于0.05)進(jìn)行篩選,對(duì)鑒定得的蛋白質(zhì)進(jìn)行pathway生物信息分析,得到相應(yīng)的生物信息通路信息。結(jié)果:根據(jù)篩選條件,我們通過Proteome Discoverer 1.3軟件共找到兩組間差異表達(dá)蛋白202個(gè),KEGG信號(hào)通路數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)了這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)涉及許多癌癥相關(guān)的生物信息通路,如:病毒致癌、惡性腫瘤中蛋白聚糖、惡性腫瘤中小分子核糖核酸、癌癥生物路徑等,此外這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)還涉及與細(xì)胞及蛋白遷移的相關(guān)生物信息通路,如:白細(xì)胞游出遷移、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)、粘著斑、緊密連接等。其中在這些信號(hào)通路中重復(fù)率較高的6個(gè)相關(guān)差異表達(dá)蛋白是:α輔肌動(dòng)蛋白-1、α輔肌動(dòng)蛋白-4、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈-9、肌糖蛋白、纖連蛋白和層粘連蛋白α4。其中早期發(fā)生肺轉(zhuǎn)移骨肉瘤患者標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)的蛋白有肌糖蛋白、纖連蛋白和層粘連蛋白α4;早期沒有發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)的蛋白有α輔肌動(dòng)蛋白-1、α輔肌動(dòng)蛋白-4和肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈-9。結(jié)論:1以早期有無發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者標(biāo)本作為研究對(duì)象,首次采用i TARQ結(jié)合LC-MS/MS的方法篩選出了骨肉瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異表達(dá)蛋白共202個(gè),KEGG信號(hào)通路數(shù)據(jù)庫分析顯示了差異蛋白質(zhì)涉及的信號(hào)通路,為研究骨肉瘤的浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了線索。2發(fā)現(xiàn)α輔肌動(dòng)蛋白1(ACTN1)、α輔肌動(dòng)蛋白4(ACTN4)、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈9(MYL9)在早期沒有發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者標(biāo)本中高表達(dá);而肌糖蛋白(TNC)、纖連蛋白(FN)、層粘連蛋白α4鏈(LAMA4)在早期發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者標(biāo)本中高表達(dá);說明這幾種蛋白可能與骨肉瘤的侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。3本研究對(duì)早期有無肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者標(biāo)本組織進(jìn)行了差異蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究,為探討與研究骨肉瘤發(fā)生發(fā)展、惡化及轉(zhuǎn)移等奠定了基礎(chǔ);為對(duì)骨肉瘤早期診斷、預(yù)后判斷以及發(fā)現(xiàn)新治療分子靶點(diǎn)從而有效治療等提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 蛋白質(zhì)組學(xué) iTRAQ技術(shù) 串聯(lián)質(zhì)譜 肺轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 綜述 骨肉瘤標(biāo)記物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展37-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號(hào)：635421