本文關鍵詞：右美托咪定通過p38 MAPK信號通路減輕大鼠腦缺血再灌注損傷和抑制凋亡的研究

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【摘要】：背景腦組織對缺血缺氧極為敏感,可產生不可逆的神經功能損傷。若缺血超過一定的時間,恢復血供常會引起進一步的腦組織損傷,即缺血再灌注損傷。在圍術期,特別是在一些高風險手術的圍術期,有并發(fā)腦血管意外的風險。預防腦血管不良事件發(fā)生,是人們一直致力于解決的臨床問題。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族在細胞內參與構成信號傳遞網絡,是一組重要的絲/蘇氨酸蛋白激酶。有研究報道,MAPK家族中的p38 MAPK信號通路在缺血或缺血再灌注后被激活,參與細胞凋亡。右美托咪定(Dex)是一種高選擇性α2腎上腺素受體激動劑。很多研究已證實了右美托咪定具有腦保護作用,其保護作用的部分機制也已經被揭示,但對其分子信號傳導通路的研究還處于起始階段。右美托咪定對腦缺血再灌注損傷的保護作用是否通過p38 MAPK信號通路,目前仍未得到證實。本研究通過大鼠大腦中動脈閉塞的方法建立局部腦缺血再灌注損傷模型,觀察局灶性腦缺血再灌注損傷中右美托咪定的神經保護作用,右美托咪定處理后對p38 MAPK信號轉導通路的影響,以及通過抑制α2受體和p38 MAPK信號通路的激活對其機制進行深入研究。探討p38 MAPK在右美托咪定保護腦缺血再灌注中的作用與調控機理。目的建立大鼠中動脈腦缺血再灌注模型,并用右美托咪定、SB203580、育亨賓進行處理,觀察大鼠神經功能損傷癥狀、腦水腫程度、腦梗死程度、大腦皮質神經細胞凋亡情況、p-p38的表達情況,驗證右美托咪定對抗局灶性腦缺血再灌注損傷的神經保護作用,探討右美托咪定在對抗腦缺血再灌注損傷中p38 MAPK通路的作用機制。方法1實驗分組:大鼠隨機分為8組,每組18只:假手術組(Sham control),假手術+右美托咪定組(Sham+Dex),假手術+p38抑制劑組(Sham+SB),假手術+育亨賓+右美托咪定組(Sham+Yoh+Dex),腦缺血再灌注組(I/R),腦缺血再灌注+右美托咪定組(I/R+Dex),腦缺血再灌注+p38抑制劑組(I/R+SB),腦缺血再灌注+育亨賓+右美托咪定組(I/R+Yoh+Dex)。2腦缺血再灌注模型建立:從大鼠右頸外動脈置線栓送入大腦中動脈,90min后退出線栓,實現(xiàn)再灌注。假手術者線栓不進入大腦中動脈。3神經功能評分:0分為無明顯神經功能損傷癥狀;1分為提尾時病左前肢屈曲,不能完全伸直;2分為行走時向左側轉圈,靜息時可維持平衡;3分為行走時向左側傾倒,站立不穩(wěn);4分為不能自發(fā)行走,意識喪失。4動物模型的評價:剔除以下大鼠:線栓置入深度不足17 mm,手術時出血較多,顱底動脈內形成凝血塊,出現(xiàn)SAH,無神經損傷癥狀,意識喪失或未到觀察時間點死亡。5給藥方式:右美托咪定于缺血同時靜脈泵注3μg/kg于5 min內泵完,剩余藥量6μg·kg-1·h-1持續(xù)泵注2 h。對照組泵注等量生理鹽水。p38抑制劑SB2035800.1 nmol/μl,缺血前30 min,5μl,側腦室注射。α2受體抑制劑育亨賓于缺血前30 min,0.5 mg/kg,腹腔注射。6腦水腫程度和腦梗死體積的測定:取腦,TTC染色后計算缺血側體積增加的百分比和腦梗死體積百分比。7免疫熒光檢測缺血腦組織Cleaved Caspase-3和p-p38表達情況,免疫熒光雙標檢測p-p38與Neu N、GFAP、Ox-42共表達情況。8蛋白免疫印記實驗檢測p-p38與p38的表達情況。結果1缺血再灌注模型評價:MCAO模型大鼠成功率約為66.1%。2神經功能評分、腦水腫和腦梗死程度、缺血區(qū)腦組織Cleaved Caspase-3表達情況:Sham control組、Sham+Dex組、Sham+SB組和Sham+Yoh+Dex組無差別。I/R組高于Sham組。I/R+Dex組明顯低于I/R組。I/R+SB組低于I/R組,高于I/R+Dex組。I/R+Yoh+Dex組低于I/R組,高于I/R+Dex組。(P0.05)3缺血區(qū)腦組織p-p38陽性細胞數、缺血去腦組織p-p38/p38比值:Sham control組、Sham+Dex組、Sham+SB組和Sham+Yoh+Dex組無差異。I/R組高于Sham組。I/R+Dex組明顯低于I/R組。I/R+SB組低于I/R組,但高于I/R+Dex組。I/R+Yoh+Dex組低于I/R組,但高于I/R+Dex組。(P0.05)4 p-p38/Neu N和p-p38/GFAP雙標分布一致區(qū)很少;p-p38/OX-42雙標存在較多的分布一致區(qū)。結論1右美托咪定具有減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷、抑制凋亡的神經保護作用。2 p38MAPK通路參與了右美托咪定對抗腦缺血再灌注損傷的神經保護。3在大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型中,右美托咪定對p38MAPK通路的影響部分依賴α2腎上腺素受體。
【關鍵詞】：腦缺血再灌注 右美托咪定 p38 MAPK
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 英文縮略詞索引14-15
• 1. 前言15-17
• 2. 材料與方法17-31
• 2.1 實驗材料17-22
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 主要試劑與藥品17-18
• 2.1.3 主要儀器與設備18-19
• 2.1.4 溶液及試劑配制19-22
• 2.2 主要實驗方法22-25
• 2.2.1 實驗分組22-23
• 2.2.2 腦缺血再灌注模型制備23-24
• 2.2.3 神經功能評分24
• 2.2.4 動物模型的評價24-25
• 2.3 給藥方式25-26
• 2.3.1 右美托咪定25
• 2.3.2 p38抑制劑SB20358025
• 2.3.3 α_2 受體抑制劑育亨賓25-26
• 2.4 腦水腫程度和腦梗死體積的測定26-27
• 2.5 免疫熒光27-28
• 2.5.1 灌注取腦27
• 2.5.2 冰凍切片27
• 2.5.3 免疫熒光染色27-28
• 2.5.4 抗體配制28
• 2.6 蛋白免疫印記實驗28-30
• 2.6.1 蛋白質提取28-29
• 2.6.2 測定蛋白濃度29
• 2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）29-30
• 2.6.4 抗體配制30
• 2.7 統(tǒng)計學分析30-31
• 3. 實驗結果31-39
• 3.1 缺血再灌注模型評價31-32
• 3.2 神經功能評分32
• 3.3 腦水腫程度32-33
• 3.4 腦梗死體積33-34
• 3.5 缺血區(qū)腦組織細胞凋亡情況34-35
• 3.6 缺血區(qū)腦組織p-p38表達情況35-36
• 3.7 p-p38與NeuN、GFAP、Ox-42免疫熒光雙標36-37
• 3.8 缺血區(qū)腦組織p-p38和表達情況37-39
• 4. 討論39-45
• 4.1 腦缺血再灌注模型的建立39-40
• 4.2 右美托咪定對腦缺血再灌注損傷和神經細胞凋亡的影響40-41
• 4.3 右美托咪定與SB203580對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響對比41-43
• 4.4 右美托咪定在對抗腦缺血再灌注損傷中對p38MAPK通路的影響與α_2受體的關系43-45
• 5. 結論45-46
• 6. 參考文獻46-49
• 綜述 右美托咪定在缺血再灌注損傷中的的應用和作用機制49-68
• 1. 簡介49-50
• 2. 缺血再灌注損傷的分子機制50
• 3. 右美托咪定的作用機制50-55
• 3.1. 遞質釋放50-51
• 3.2. 離子通道51
• 3.3. 信號通路51-53
• 3.4. 基因表達53
• 3.5. 炎癥反應53-55
• 4. 右美托咪定在I/R損傷中的作用55-59
• 4.1. 腦保護作用55-56
• 4.2. 脊髓保護作用56-57
• 4.3. 心肌保護作用57
• 4.4. 肺保護作用57-58
• 4.5. 腎臟保護作用58
• 4.6. 腸保護作用58-59
• 4.7. 肝臟保護作用59
• 4.8. 其他臟器保護作用59
• 5. 總結59-61
• 6. 參考文獻61-68
• 個人簡歷68-69
• 致謝69

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