本文關(guān)鍵詞：不同來源的EPCs對NSCs增殖分化的影響

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【摘要】：第一部分不同胎齡SD胎鼠脊髓源性NSCs特性的比較目的探究不同胎齡SD胎鼠脊髓源性NSCs增殖分化能力的差異。方法將選取的不同孕齡的SD孕鼠隨機分為3組:A組(孕12d)、B組(孕14d)、C組(孕16d)。采用酶消化法結(jié)合機械分離法提取脊髓源性NSCs,檢測不同時間點各組NSCs神經(jīng)球的直徑和數(shù)量,通過CCK-8法繪制各組NSCs的生長曲線。Brd-U和Nestin免疫熒光染色鑒定各組NSCs的增殖特性和神經(jīng)干細胞屬性。10%FBS誘導(dǎo)分化后行β-tubulinⅢ、GFAP免疫熒光染色分別鑒定誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞,比較各組NSCs誘導(dǎo)分化的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和原漿型星形膠質(zhì)細胞的比例。結(jié)果各組NSCs Brdu、Nestin、β-tubulinⅢ、GFAP免疫熒光染色均為陽性。B組神經(jīng)元細胞的分化比例在三組中最高(22.74±0.79)%;后兩組NSCs神經(jīng)球直徑和數(shù)量以及神經(jīng)元的分化比例第一組(P0.05)。第3代NSCs培養(yǎng)第5天B組細胞OD值(0.5107±0.0272)高于C組(P0.05)。結(jié)論采用機械分離法結(jié)合酶消化法獲取的脊髓源性NSCs在體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖活力強,性質(zhì)穩(wěn)定;E14天取材培養(yǎng)的NSCs在體外生物學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,細胞的增殖活力旺盛,誘導(dǎo)后分化為神經(jīng)元的分化比例高于E12d和E16d。第二部分SD胎鼠腦源性NSCs和脊髓源性NSCs增殖分化能力的比較目的比較SD胎鼠腦源性NSCs和脊髓源性NSCs在體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖分化能力的差異。方法采用酶消化法結(jié)合機械分離法提取孕14天SD胎鼠腦源性NSCs和脊髓源性NSCs,通過Nestin和Brd-U鑒定NSCs的神經(jīng)干細胞屬性和增殖特性,檢測比較各組NSCs神經(jīng)球的直徑和數(shù)量,采用CCK-8法繪制細胞曲線,比較不同來源NSCs的生長活力。10%FBS誘導(dǎo)后對分化細胞行β-TubulinⅢ和GFAP免疫熒光染色分別鑒定神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞。比較兩組神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和原漿型星形膠質(zhì)細胞的分化比例。結(jié)果兩種來源的NSCs對Nestin和Brd-U免疫熒光染色均呈陽性反應(yīng);兩組NSCs誘導(dǎo)后均可分化β-TubulinⅢ陽性的神經(jīng)元和GFAP陽性的星形膠質(zhì)細胞。腦源性NSCs誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元比例(27.56±0.79)%較脊髓源性NSCs(25.58±0.72)%相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但是后者誘導(dǎo)分化后原漿型星形膠質(zhì)細胞的比例(53.09±2.88)%則明顯高于腦源性NSCs(50.60±2.88)%(P0.05)。結(jié)論腦源性NSCs分化后神經(jīng)元的比例高于脊髓源性NSCs,而原漿型星形膠質(zhì)細胞的分化比例后者高于前者。第三部分骨髓源性EPCs和外周血源性EPCs對NSCs的生物學(xué)作用目的探究骨髓和外周血來源的EPCs對神經(jīng)干細胞增殖分化能力的影響。方法采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁分離法提取SD大鼠外周血源性EPCs和骨髓源性EPCs。通過酶消化法結(jié)合機械分離法獲得孕14d SD胎鼠脊髓源性NSCs。之后將EPCs接種于Transwell小室上層,NSCs位于下層,分為3組:A組,外周血源性EPCs+NSCs;B組,骨髓源性EPCs+NSCs;C組,DMEM條件培養(yǎng)基+NSCs。通過攝取Dil-ac LDL、結(jié)合FITC-UEA-1實驗及CD34和v WF免疫熒光鑒定EPCs。Nestin/β-tubulin-Ⅲ/GFAP免疫熒光染色鑒定NSCs。檢測各組一周內(nèi)不同時間點神經(jīng)球的直徑和數(shù)量,采用CCK-8法繪制各組NSCs的生長曲線;10%FBS誘導(dǎo)分化后行β-tubulin-Ⅲ免疫熒光染色檢測各組神經(jīng)元分化比例,GFAP免疫熒光染色檢測星形膠質(zhì)細胞和原漿型星形膠質(zhì)細胞的分化比例。結(jié)果來自外周血和骨髓的兩種不同來源的EPCs均能夠吞噬Dil-ac LDL,也能結(jié)合FITC-UEA-1。CD34和v WF免疫熒光染色均為陽性。A組和B組NSCs在體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖能力均高于C組(P0.05);誘導(dǎo)后B組神經(jīng)元的分化比例(27.37±0.80)%和原漿型星形膠質(zhì)細胞的分化比例(53.78±2.37)%高于A組和C組(P0.05)。結(jié)論骨髓源性EPCs較外周血源性EPCs更能促進脊髓源性NSCs向神經(jīng)元和原漿型星形膠質(zhì)細胞分化。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干細胞 神經(jīng)元 星形膠質(zhì)細胞 原漿型星形膠質(zhì)細胞 神經(jīng)干細胞 不同來源 分化 神經(jīng)元 星形膠質(zhì)細胞 脊髓損傷 內(nèi)皮祖細胞 神經(jīng)干細胞 共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-11
• 前言11-16
• 第一部分 不同胎齡胎鼠脊髓源性NSCs特性的比較16-27
• 材料與方法16-20
• 結(jié)果20-23
• 結(jié)論23-24
• 討論24-27
• 第二部分 腦源性和脊髓源性NSCs分化特性的比較27-37
• 材料與方法28-30
• 結(jié)果30-34
• 結(jié)論34
• 討論34-37
• 第三部分 骨髓源性和外周血源性EPCs對NSCs增殖分化的影響37-48
• 材料與方法37-40
• 結(jié)果40-44
• 結(jié)論44
• 討論44-48
• 參考文獻48-61
• 課題資助情況61-62
• 在學(xué)期間的研究成果62-63
• 致謝63-64
• 附錄1 綜述64-71
• 參考文獻69-71
• 附錄2 中英文縮略詞對照表71

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本文編號：546005