本文關(guān)鍵詞：透明質(zhì)酸水凝膠包封對(duì)攜帶BMP-2基因的腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性及其表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:探討攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后應(yīng)用透明質(zhì)酸水凝膠(hyaluronic acid hydrogel,HAH)包封對(duì)BMSCs增殖能力及其表達(dá)目標(biāo)蛋白BMP-2的影響。方法:體外分離、提取、鑒定BMSCs,并將提前構(gòu)建好的Ad-BMP-2轉(zhuǎn)染BMSCs并使用HAH進(jìn)行包封,激光共聚焦顯微鏡下觀察Ad-BMP-2轉(zhuǎn)染的BMSCs在HAH包封下的三維形態(tài)。實(shí)驗(yàn)分為4組(各組培養(yǎng)條件無(wú)差異):A組(未轉(zhuǎn)染BMP-2的BMSCs);B組(HAH+未轉(zhuǎn)染BMP-2的BMSCs);C組(轉(zhuǎn)染BMP-2的BMSCs);D組(HAH+轉(zhuǎn)染BMP-2的BMSCs)。分別一周內(nèi)不同時(shí)相點(diǎn)(1d、2d、3d……7d)使用CCK-8法檢測(cè)各組OD值來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖活性;ELISA法檢測(cè)各組BMP-2的量(pg/ml)來(lái)評(píng)價(jià)目標(biāo)蛋白的表達(dá)狀況。結(jié)果 :激光共聚焦顯微鏡三維重建可觀察到BMSCs可在HAH中任意平面鋪展,有充足的生長(zhǎng)空間。BMSCs的增殖活性檢測(cè)顯示,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞增殖活性逐漸增強(qiáng),A組、C組4d后的OD值較1d時(shí)明顯增大(P0.05);B組和D組5d后的OD值較1d時(shí)明顯增大(P0.05);至7d時(shí),A組OD值為1.283±0.061,B組為1.844±0.075;C組為1.570±0.099;D組為1.976±0.142,包封HAH的B、D組OD值均優(yōu)于沒(méi)有包封HAH的A、C組(P0.05)。BMP-2的表達(dá)在A、B組較弱,不同時(shí)間點(diǎn)間無(wú)顯著性差異(P0.05);C、D組的BMP-2表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于A、B組(P0.05);從4d時(shí)起,C、D兩組的BMP-2表達(dá)顯著增加(與1d時(shí)比較P0.05),且D組明顯優(yōu)于C組,差異有顯著性(P0.05)。結(jié)論 :三維環(huán)境下(即包封HAH后),Ad-BMP-2轉(zhuǎn)染的BMSCs不僅有較強(qiáng)的增殖活性;而且對(duì)BMP-2的表達(dá)具有一定的促進(jìn)作用。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院脊柱外科;濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院創(chuàng)傷骨科;
【關(guān)鍵詞】： 透明質(zhì)酸水凝膠 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 髓核組織工程
【基金】：山東省高等學(xué)�？萍加�(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):J14LL04) 山東省自然科學(xué)基金青年基金(編號(hào):ZR2014CQ042)
【分類號(hào)】：R681.5
【正文快照】： of Jining Medical University,Jining,Shandong,272000,China頸椎及腰椎椎間盤(pán)退變是脊柱退行性疾病發(fā)生的第一步,被認(rèn)為是頸背痛及腰痛的常見(jiàn)原因之一,嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量[1];如何有效地減緩甚至逆轉(zhuǎn)椎間盤(pán)的退變是當(dāng)前骨科醫(yī)生的夢(mèng)想和挑戰(zhàn)。生長(zhǎng)因子在椎間盤(pán)修復(fù)領(lǐng)

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1 楊廣杰;TGF-β及BMP-2的表達(dá)與酒精性和激素性股骨頭壞死關(guān)系的對(duì)比研究[D];河南大學(xué);2015年

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