本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶Cα相互作用蛋白1調(diào)控AMPA受體在瑞芬太尼痛覺過敏中的機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：作為一種μ-阿片受體激動劑,瑞芬太尼能夠快速起效與清除,并且不發(fā)生蓄積,因而在臨床麻醉時得到廣泛青睞。但瑞芬太尼痛覺過敏的發(fā)生概率明顯高于其他阿片類藥物,這在很大程度上限制了瑞芬太尼的臨床應用,闡明其機制有助于制訂預防其誘發(fā)痛覺過敏的措施。前期有研究證實,在瑞芬太尼所致痛覺過敏的發(fā)生和維持這一過程中,NMDA受體活化-鈣離子內(nèi)流增多-PKC激活這一系列反應所介導的脊髓中樞敏化參與其中。NMDA受體與AMPA受體,兩者均是興奮性谷氨酸離子通道型受體。上述兩種受體大量分布于脊髓背根神經(jīng)節(jié)及其背角淺層。兩者的功能相似,參與上傳疼痛信號,并且介導形成脊髓中樞敏化。而蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)在人和動物的組織中均有表達,是蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)的靶蛋白之一,也是在PKCα和突觸后膜AMPA受體蛋白間起重要作用的銜接蛋白。且有研究發(fā)現(xiàn),PICK1參與了炎癥誘發(fā)的痛覺過敏的形成和維持。但PICK1在瑞芬太尼痛覺過敏時對于AMPA受體的運輸和表達的影響未見報道。因此本研究擬探討PICK1及AMPA受體亞單位運輸?shù)淖兓罢{(diào)節(jié)在瑞芬太尼痛覺過敏形成機制中的作用。第一部分:瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓PICK1表達水平的變化目的通過評價瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓PICK1表達水平的變化,探討PICK1在瑞芬太尼引發(fā)痛覺過敏中的可能機制。方法SPF級雄性SD大鼠16只,體重240~260g,42~49日齡,尾靜脈置管成功后,采用隨機數(shù)字表法分為2組(n=8):瑞芬太尼組(R組):按1.2μg·kg-1·min-1的標準給大鼠輸注瑞芬太尼(經(jīng)尾靜脈),輸注時間為60min;對照組(C組):經(jīng)尾靜脈置管輸注等體積的生理鹽水0.12 ml·kg-1·min-1,輸注時間為60min。分別于生理鹽水或瑞芬太尼輸注前24h、停止輸注后2、6、24和48 h時測定機械縮足反應閾(PWT)和熱縮足潛伏期(PWL)。于輸注后48 h測定痛閾后處死大鼠,取L4~6節(jié)段脊髓,采用RT-qPCR法測定PICKl mRNA表達水平,采用Western blot法測定PICKl蛋白表達水平。結(jié)果R組PWT降低、PWL縮短(P0.05)。且R組PICK1 m RNA及蛋白表達水平均升高(p0.05)。結(jié)論輸注瑞芬太尼導致了痛覺過敏;瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓pick1mrna及蛋白表達水平上調(diào),這種改變有可能與形成瑞芬太尼痛覺過敏有關(guān)。第二部分:瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓ampa受體亞單位表達及運輸水平的變化目的通過測定大鼠發(fā)生瑞芬太尼痛覺過敏時,脊髓組織中ampa受體亞單位表達水平的改變以及對其運輸情況的影響,從而探究該受體亞單位的表達水平以及運輸改變是否以及如何參與瑞芬太尼所致的痛覺過敏。方法spf級雄性sd大鼠16只,體重240~260g,42~49日齡,尾靜脈置管成功后,采用隨機數(shù)字表法分為2組(n=8):瑞芬太尼組(r組):按1.2μg·kg-1·min-1的標準給大鼠輸注瑞芬太尼(經(jīng)尾靜脈);對照組(c組):經(jīng)尾靜脈置管輸注生理鹽水0.12ml·kg-1·min-1,輸注時間為60min。分別于生理鹽水或瑞芬太尼輸注前24h、停止輸注后2、6、24和48h測定機械縮足反應閾(pwt)和熱縮足潛伏期(pwl)。于輸注后48h測定痛閾后處死大鼠,取l4~6節(jié)段脊髓,采用免疫熒光染色法觀察脊髓背角glur1、glur2、glur3陽性細胞的表達。采用westernblot法測定脊髓細胞膜(s)及胞漿內(nèi)(i)ampa受體glur1、glur2及glur3亞單位的表達。結(jié)果與c組比較,r組pwt降低、pwl縮短(p0.05)。且r組脊髓背角glur1、glur3亞單位陽性細胞表達增多,glur2表達減少(p0.05);sglur1、sglur3表達增加,sglur2表達減少(p0.05),iglur1、iglur2和iglur3表達無明顯變化(p0.05)。結(jié)論輸注瑞芬太尼導致了大鼠的痛覺過敏;大鼠發(fā)生瑞芬太尼痛覺過敏時,其脊髓組織中的ampa受體glur2陽性細胞表達減少,glur1、glur3亞單位陽性細胞表達增多;glur1、glur3向細胞膜轉(zhuǎn)運增加、glur2向胞漿內(nèi)化增加,該變化可能參與了瑞芬太尼痛覺過敏形成的機制。第三部分:pick1反義寡核苷酸對大鼠瑞芬太尼痛覺過敏時脊髓組織中ampa受體亞單位表達及運輸水平的變化的影響目的通過pick1反義寡核苷酸敲低大鼠脊髓pick1蛋白的表達水平,評價pick1對于瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓ampa受體glur1、glur2、glur3亞單位表達及運輸?shù)淖兓挠绊憽７椒?parta:spf級雄性sd大鼠96只,體重240~260g,42~49日齡,采用隨機數(shù)字表法分為3組(n=32):對照組(NS組)、PICK1反義寡核苷酸組(AS組)、PICK1錯義寡核苷酸組(MS組)。三組均鞘內(nèi)置管:NS組經(jīng)鞘內(nèi)置管給予10μl生理鹽水;AS組經(jīng)鞘內(nèi)置管給予10μg/10μl PICK1反義寡核苷酸(ASDON),MS組經(jīng)鞘內(nèi)置管給予10μg/10μl PICK1錯義寡核苷酸(MSDON)。每日給藥1次,連續(xù)4d。第5d~8d每天隨機處死4只大鼠,取脊髓L4-6節(jié)段,采用western blot法測定脊髓PICK1蛋白表達水平的變化。Part B:確定經(jīng)鞘內(nèi)置管給的反義寡核苷酸起作用后,分別取NS組、AS組的剩余大鼠進行尾靜脈置管,隨機分為4組(n=8):NS+R組和AS+R組分別經(jīng)尾靜脈置管輸注瑞芬太尼1.2μg·kg-1·min-160 min;NS+NS組和AS+NS組分別經(jīng)尾靜脈置管輸注與瑞芬太尼等容量生理鹽水60min(速率為0.12 ml·kg-1·min-1)。分別于生理鹽水或瑞芬太尼輸注前24h、停止輸注后2、6、24和48 h時測定PWT、PWL。于輸注后48 h時測定痛閾后處死大鼠,取L4~6節(jié)段脊髓,采用免疫組化染色法觀察脊髓背角GluR1、GluR2、GluR3亞單位陽性細胞的表達。采用western blot法測定脊髓細胞膜(s)及胞漿內(nèi)(i)AMPA受體GluR1、GluR2及GluR3亞單位的表達。結(jié)果與NS+NS組比較,NS+R組和AS+R組PWT降低、PWL縮短(P0.05);脊髓背角GluR1、GluR3亞單位陽性細胞表達增多、GluR2表達減少(P0.05);sGluR1、s GluR3表達增加,sGluR2表達減少(P0.05),iGluR1和iGluR2表達無明顯變化(P0.05)。與NS+R組比較,AS+R組PWT升高、PWL延長(P0.05);脊髓背角GluR1亞單位陽性細胞表達無明顯改變(P0.05),GluR3陽性細胞表達降低,GluR2表達增多(P0.05);sGluR3表達降低,sGluR2表達增多(P0.05)。sGluR1、iGluR1、iGluR2和iGluR3表達無明顯變化(P0.05)。結(jié)論PICK1通過調(diào)節(jié)脊髓組織中AMPA受體的GluR2、GluR3這兩個亞單位,影響其表達和運輸,介導瑞芬太尼痛覺過敏的過程,而其對GluR1亞單位在表達和運輸并無影響。
【關(guān)鍵詞】：瑞芬太尼 痛覺過敏 PICK1 AMPA受體 反義核苷酸 運輸
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-15
• 縮略語/符號說明15-18
• 前言18-21
• 研究現(xiàn)狀、成果18-19
• 研究目的、方法19-21
• 一、瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓PICK1表達水平的變化21-38
• 1.1 對象和方法21-31
• 1.1.1 實驗材料21-23
• 1.1.1.1 實驗動物21
• 1.1.1.2 實驗儀器及耗材21-22
• 1.1.1.3 主要實驗試劑22-23
• 1.1.1.4 主要試劑制備23
• 1.1.2 實驗方法23-31
• 1.1.2.1 實驗動物分組23
• 1.1.2.2 大鼠尾靜脈置管23-24
• 1.1.2.3 行為學測定24-25
• 1.1.2.4 大鼠腰斷脊髓標本的采集25
• 1.1.2.5 RT-qPCR檢測瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓PICK1的mRNA水平變化25-27
• 1.1.2.6 Western Blot檢測瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓PICK1的蛋白水平變化27-30
• 1.1.2.7 統(tǒng)計學分析30-31
• 1.2 結(jié)果31-33
• 1.2.1 瑞芬太尼輸注后大鼠熱刺激縮足潛伏期(PWL)和機械刺激縮足閾值(PWT)的變化31-32
• 1.2.2 各組大鼠腰段脊髓mRNA及蛋白表達水平變化32-33
• 1.3 討論33-37
• 1.3.1 瑞芬太尼的痛覺過敏現(xiàn)象33
• 1.3.2 瑞芬太尼痛覺過敏的動物實驗依據(jù)33-34
• 1.3.3 瑞芬太尼痛覺過敏的研究現(xiàn)狀34-35
• 1.3.4 動物模型的建立35-36
• 1.3.4.1 尾靜脈置管35
• 1.3.4.2 瑞芬太尼輸注的劑量選擇35
• 1.3.4.3 研究中時間點的選擇35
• 1.3.4.4 行為學測定35-36
• 1.3.5 PICK136-37
• 1.3.5.1 PICK1的分子結(jié)構(gòu)36
• 1.3.5.2 PICK1的分布及生物學功能36
• 1.3.5.3 PICK1與RIH36-37
• 1.4 小結(jié)37-38
• 二、瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓AMPA受體亞單位表達及運輸水平的變化38-46
• 2.1 對象和方法38-40
• 2.1.1 實驗材料38
• 2.1.1.1 實驗動物38
• 2.1.1.2 實驗儀器及耗材38
• 2.1.1.3 主要實驗試劑38
• 2.1.1.4 主要試劑制備38
• 2.1.2 實驗方法38-40
• 2.1.2.1 實驗動物分組38
• 2.1.2.2 大鼠尾靜脈置管38-39
• 2.1.2.3 行為學測定39
• 2.1.2.4 大鼠腰斷脊髓標本的采集39
• 2.1.2.5 免疫熒光染色檢測瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、GluR3亞單位的表達39
• 2.1.2.6 Western Blot檢測瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓AMPA受體GluR1、GluR2、GluR3亞單位的運輸變化39-40
• 2.1.2.7 統(tǒng)計學分析40
• 2.2 結(jié)果40-42
• 2.2.1 瑞芬太尼輸注后大鼠熱刺激縮足潛伏期(PWL)和機械刺激縮足閾值(PWT)的變化40
• 2.2.2 各組大鼠腰段脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、Glu R3亞單位在脊髓背角的表達情況40-42
• 2.2.3 各組大鼠腰段脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、Glu R3亞單位在脊髓背角的運輸情況42
• 2.3 討論42-45
• 2.3.1 AMPA受體亞單位的表達及運輸42-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 三、PICK1反義寡核苷酸對瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓AMPA受體表達及運輸水平的變化的影響46-62
• 3.1 對象和方法46-49
• 3.1.1 實驗材料46
• 3.1.1.1 實驗動物46
• 3.1.1.2 實驗儀器及耗材46
• 3.1.1.3 主要實驗試劑46
• 3.1.1.4 主要試劑制備46
• 3.1.2 實驗方法46-49
• 3.1.2.1 實驗動物分組及實驗流程46-47
• 3.1.2.2 大鼠鞘內(nèi)置管47-48
• 3.1.2.3 運動功能測試48
• 3.1.2.4 大鼠尾靜脈置管48
• 3.1.2.5 行為學測定48
• 3.1.2.6 大鼠腰斷脊髓標本的采集48
• 3.1.2.7 Western Blot檢測Part A大鼠脊髓PICK1的蛋白水平變化48
• 3.1.2.8 免疫熒光染色檢測Part B大鼠脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、GluR3亞單位的表達48-49
• 3.1.2.9 Western Blot檢測Part B大鼠脊髓AMPA受體GluR1、GluR2、GluR3亞單位的運輸變化49
• 3.1.2.10統(tǒng)計學分析49
• 3.2 結(jié)果49-56
• 3.2.1 大鼠鞘內(nèi)置管后運動功能測試結(jié)果49
• 3.2.2 大鼠鞘內(nèi)置管注入 2%利多卡因結(jié)果49
• 3.2.3 大鼠鞘內(nèi)置管給藥后PICK1蛋白的表達49-51
• 3.2.4 瑞芬太尼輸注后大鼠熱刺激縮足潛伏期(PWL)和機械刺激縮足閾值(PWT)的變化51-52
• 3.2.5 各組大鼠腰段脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、Glu R3亞單位在脊髓背角的表達情況52-54
• 3.2.6 各組大鼠腰段脊髓AMPA受體Glu R1、GluR2、Glu R3亞單位在脊髓背角的運輸情況54-56
• 3.3 討論56-61
• 3.3.1 反義寡核苷酸技術(shù)56-57
• 3.3.2 鞘內(nèi)置管技術(shù)57
• 3.3.3 PICK1反義寡核苷酸對于PICK1蛋白表達水平的影響57-58
• 3.3.4 PICK1反義寡核苷酸對于瑞芬太尼痛覺過敏大鼠的行為學的影響58
• 3.3.5 PICK1反義寡核苷酸對于瑞芬太尼痛覺過敏大鼠的脊髓AMPA受體的表達和運輸?shù)挠绊?/span>58-59
• 3.3.6 PICK1與AMPA受體亞單位的表達及運輸?shù)难芯楷F(xiàn)狀59-61
• 3.4 小結(jié)61-62
• 結(jié)論62
• 論文創(chuàng)新點62-63
• 不足之處63-64
• 參考文獻64-74
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明74-76
• 綜述 α-氨基-3 羥基5甲基4異惡唑丙酸受體在瑞芬太尼痛覺過敏中的作用的研究進展76-85
• 綜述參考文獻82-85
• 致謝85-86
• 個人簡歷86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王志芬;王國林;敖吉瑩;丁玲;李楠;湯曉紅;張麟臨;舒瑞辰;元元;;PICK1在瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓含GluR1及GluR2亞基的AMPA受體轉(zhuǎn)運中的作用[J];中華麻醉學雜志;2015年08期

2 閆麗萍;侯保權(quán);吳辛甜;王玲玲;馬騁;;電針對坐骨神經(jīng)慢性縮窄損傷大鼠脊髓α-氨基-3-羧基-5-甲基異惡唑-4-丙酸受體表達的影響[J];針刺研究;2014年05期

3 王苗苗;王超;楊美華;王國林;;α-氨基-3羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸受體運輸參與學習記憶機制的研究進展[J];國際麻醉學與復蘇雜志;2014年06期

4 ;AMPA receptor trafficking in inflammation-induced dorsal horn central sensitization[J];Neuroscience Bulletin;2012年02期

5 馬劍鋒;黃志蓮;李軍;胡社軍;連慶泉;;瑞芬太尼致術(shù)后患者痛覺過敏的隊列研究[J];中華醫(yī)學雜志;2011年14期

6 吳曉麗;馬正良;顧小萍;崔松勤;;氯胺酮預防瑞芬太尼痛覺過敏的實驗研究[J];國際麻醉學與復蘇雜志;2010年02期

7 王佩;王海祥;王維平;;突觸可塑性與學習記憶[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2008年05期

8 李依澤;王超;湯曉紅;王春艷;謝克亮;王海云;于泳浩;王國林;;切口痛-瑞芬太尼痛覺過敏大鼠脊髓背角含GluR1和GluR2亞基AMPA受體表達的變化[J];中華麻醉學雜志;2013年07期

  本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶Cα相互作用蛋白1調(diào)控AMPA受體在瑞芬太尼痛覺過敏中的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：510255