本文關(guān)鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)外成骨能力的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞(Synovial mesenchymal stem cells,SMSC)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSC)在體外成軟骨、成骨潛能,評估SMSC與BMSC復(fù)合羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)骨修復(fù)材料在體內(nèi)異位成骨能力,并比較SMSC與BMSC在體內(nèi)外的成骨能力。方法:采用貼壁篩選法和酶消化法分別獲得SMSC和BMSC,利用流式細(xì)胞儀對這二種細(xì)胞進(jìn)行鑒定;取二種細(xì)胞分別進(jìn)行成軟骨、成骨誘導(dǎo)分化,利用甲苯胺藍(lán)染色(Toluidine blue staining)鑒定成軟骨分化,茜素紅染色(Alizarin Red staining)和堿性磷酸酶染色(Alkaline phosphatase staining)鑒定成骨分化;利用MTT法檢測P1、P2、P3代SMSC和BMSC細(xì)胞增殖率;取第3代SMSCs,成骨誘導(dǎo)1、7、14、21d后采用實時熒光定量PCR檢測成軟骨相關(guān)基因Ⅱ型膠原、蛋白聚糖,和成骨相關(guān)基因骨鈣素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型膠原(Collagen typeⅠ,COLⅠ)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)以及Runx-2 m RNA表達(dá)情況,利用Elisa法檢測成骨誘導(dǎo)后1、3、5、7、9和11d ALP活性,茜素紅S法檢測成骨誘導(dǎo)后7、14、21和28d各組鈣鹽沉積;取第3代SMSC,成骨誘導(dǎo)21d后利用Western-blot法檢測各組OCN和RUNX-2蛋白表達(dá)情況;體內(nèi)實驗中取第3代SMSC和BMSC接種于HA/CS/PLLA支架材料植入大鼠右下肢肌袋內(nèi)作為實驗組,以植入單純HA/CS/PLLA支架材料為對照組,術(shù)后8周通過X線片及組織學(xué)觀察并分析SMSC和BMSC體內(nèi)成骨情況。結(jié)果:提純后SMSC和BMSC表面抗原CD90、CD105、CD147、CD44表達(dá)均超過95%,而CD34、CD117、CD14、CD45表達(dá)均低于10%;油紅O染色可見紅色脂滴形成,茜素紅染色可見紅色鈣化灶,ALP染色可見細(xì)胞質(zhì)咖啡樣深染;P1代SMSC與BMSC細(xì)胞生長緩慢,呈直線性生長,P2、P3代SMSC與BMSC細(xì)胞則呈“S”形生長;SMSC和BMSC成骨誘導(dǎo)14d后Ⅱ型膠原、蛋白聚糖基因表達(dá)明顯增高,且SMSC組表達(dá)明顯高于BMSC組(P0.05),SMSC和BMSC成骨誘導(dǎo)7d后Ⅰ型膠原、ALP、OCN、Runx-2表達(dá)陽性,且BMSC表達(dá)顯著高于SMSC組(P0.05);成骨誘導(dǎo)3 d后ALP活性開始呈陽性,且BMSC組明顯高于SMSC組,7 d時達(dá)峰值(P0.05);而成骨誘導(dǎo)14 d鈣含量表達(dá)陽性,BMSC組明顯高于SMSC組,隨著誘導(dǎo)時間延長鈣含量逐漸增加(P0.05)。術(shù)后8周X線片顯示SMSC與BMSC組均有高密度影,灰度值分析顯示BMSC組灰度值顯著高于SMSC組;組織學(xué)結(jié)果顯示,兩組均可見新生骨形成,但BMSC組成骨量明顯多于SMSC組(P0.05)。結(jié)論:SMSC和BMSC在體內(nèi)外均具有成軟骨和成骨特性,且BMSC在體內(nèi)外的成骨能力均高于SMSC。
【關(guān)鍵詞】：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 堿性磷酸酶 骨鈣素 大鼠
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R68
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 研究材料（資料與內(nèi)容）與方法14-30
• 1 研究內(nèi)容14
• 2 實驗材料14-16
• 3 實驗方法16-29
• 3.1 原代的提取16-17
• 3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代17
• 3.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原17
• 3.4 細(xì)胞的誘導(dǎo)分化17-18
• 3.5 MTT 法檢測各代細(xì)胞增殖率18-19
• 3.6 實時熒光定量PCR檢測相關(guān)基因的表達(dá)19-23
• 3.7 ELISA法檢測ALP活性23
• 3.8 茜素紅S法檢測鈣鹽沉積23-24
• 3.9 Western-blot法檢測OCN和RUNX-2蛋白表達(dá)24-29
• 3.10 體內(nèi)實驗觀察29
• 4 統(tǒng)計學(xué)方法29-30
• 結(jié)果30-37
• 討論37-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：502671