本文關(guān)鍵詞：依普黃酮對(duì)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨生物學(xué)、生物力學(xué)性能作用的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、研究Indian hedgehog(Ihh)信號(hào)通路抑制劑—依普黃酮(ipriflavone,IP)是否可以阻止骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)軟骨細(xì)胞的肥大分化及軟骨組織的降解,從而緩解OA;2、研究IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖、凋亡的影響,從而為治療OA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù);3、運(yùn)用微管吸吮技術(shù),研究Ihh(力學(xué)敏感基因)通路抑制劑—IP是否可改善OA軟骨細(xì)胞的生物力學(xué)性能。方法:1、選取因OA進(jìn)行膝關(guān)節(jié)置換而截下的outbridge評(píng)分1-2分的脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)軟骨,消化成軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、切成4mm3大小進(jìn)行軟骨組織塊培養(yǎng);2、采用熒光免疫的方法鑒定軟骨細(xì)胞表型,以確定所培養(yǎng)的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞;3、軟骨細(xì)胞、軟骨組織塊實(shí)驗(yàn)均分為DMSO空白組、IP低濃度組、IP高濃度組;4、于IP干預(yù)2天培養(yǎng)后細(xì)胞進(jìn)行RT-q PCR,檢測(cè)SMO、Gli-1、Gli-2、Gli-3(Ihh信號(hào)通路指標(biāo))、Runx-2、MMP-13(軟骨細(xì)胞肥大指標(biāo))及COL II、Aggrecan(軟骨代謝指標(biāo));細(xì)胞進(jìn)行Western Blotting,檢測(cè)COL II、MMP-13、COL X蛋白的變化;5、于IP干預(yù)2天培養(yǎng)后采用CCK-8、Ed U及流式方法檢測(cè)IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖、凋亡的影響情況;6、于IP干預(yù)2天培養(yǎng)后,細(xì)胞進(jìn)行微管吸吮,觀察IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞生物力學(xué)性能的影響。7、IP干預(yù)OA軟骨組織塊2天后石蠟切片番紅O-固綠染色,高倍鏡下觀察蛋白多糖的變化,并進(jìn)行組織學(xué)Mankin評(píng)分;進(jìn)行免疫熒光染色,檢測(cè)COL II、Runx-2、COL X蛋白表達(dá)的變化;結(jié)果:1、軟骨細(xì)胞表型鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色顯示,所培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞I型膠原(COL I)染色為陰性,II型膠原(COL II)的染色為陽(yáng)性,可以確定從軟骨組織中分離的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞;2、IP通過(guò)抑制Ihh信號(hào)通路對(duì)OA軟骨細(xì)胞的肥大分化及細(xì)胞代謝影響的RT-q PCR結(jié)果:IP藥物組Ihh信號(hào)通路指標(biāo)SMO、Gli-1、Gli-2、Gli-3及軟骨細(xì)胞肥大分化指標(biāo)Runx-2、MMP-13的m RNA較DMSO空白組表達(dá)水平下降(P0.05),軟骨細(xì)胞代謝指標(biāo)Aggrecan(蛋白多糖)、COL II的m RNA水平較DMSO對(duì)照組顯著增高(P0.05);3、IP可以促進(jìn)OA軟骨Col II蛋白表達(dá),抑制MMP-13、COL X蛋白表達(dá):IP干預(yù)OA軟骨細(xì)胞2天后,Western Blotting結(jié)果表明,IP藥物組OA軟骨細(xì)胞的Col II蛋白表達(dá)明顯多于DMSO對(duì)照組,MMP-13、COL X(軟骨細(xì)胞肥大分化的OA指標(biāo))表達(dá)較DMSO對(duì)照組更少,灰度值半定量結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4、IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖、凋亡的影響:首先用CCK-8檢測(cè)增殖情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)第3天、第4天時(shí),IP藥物組的細(xì)胞增殖明顯高于DMSO對(duì)照組(P0.05);針對(duì)細(xì)胞第3天的增殖結(jié)果,采用Ed U染色驗(yàn)證了CCK-8檢測(cè)增殖的結(jié)果;流式方法測(cè)IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn),細(xì)胞培養(yǎng)第3天,IP藥物組的軟骨細(xì)胞凋亡率相對(duì)DMSO對(duì)照組均顯著降低(P0.05);5、微管吸吮分析IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞生物力學(xué)特性的影響:人OA軟骨細(xì)胞表現(xiàn)為典型的黏彈性固體蠕變特征,細(xì)胞瞬時(shí)模量(E0)、平衡模量(E∞)、表觀黏性(μ)較正常軟骨細(xì)胞均升高,但用IP藥物干預(yù)后,OA軟骨細(xì)胞的E0、E∞、μ明顯降低,生物力學(xué)性能得到改善(P0.05);6、IP體外干預(yù)人OA軟骨組織塊2天后番紅O-固綠染色顯示IP對(duì)OA軟骨組織塊蛋白多糖的影響:IP藥物干預(yù)人OA軟骨組織塊后,IP藥物組軟骨組織塊相對(duì)DMSO對(duì)照組其軟骨細(xì)胞更多、蛋白多糖(PG)染色更深;組織學(xué)Mankin評(píng)分DMSO對(duì)照組、IP低濃度組、IP高濃度組3組分別為8.34±0.58,4.67±0.57(P0.01),2.34±0.28(P0.001),分?jǐn)?shù)越低,OA軟骨退變?cè)捷p;7、免疫熒光染色顯示IP對(duì)OA軟骨組織塊相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:IP體外干預(yù)人OA軟骨組織塊2天后的免疫熒光染色顯示,IP藥物組軟骨組織塊的Col II明顯多于DMSO對(duì)照組,Runx-2、COL X表達(dá)較DMSO對(duì)照組更少�？梢�(jiàn),IP可以促進(jìn)OA軟骨組織塊Col II表達(dá),抑制Runx-2、COL X表達(dá),從而緩解軟骨組織塊的降解。結(jié)論:Ihh通路抑制劑—依普黃酮(IP)在細(xì)胞水平及擬在體的組織塊水平證實(shí)可以抑制Ihh信號(hào)通路,進(jìn)而阻止OA軟骨細(xì)胞的肥大分化及軟骨組織的降解,從而對(duì)OA時(shí)的軟骨具有保護(hù)作用;同時(shí),IP也可以促進(jìn)OA軟骨細(xì)胞的增殖,抑制其凋亡,改善體外培養(yǎng)OA軟骨細(xì)胞的生物力學(xué)性能,在OA治療方面具有積極意義。因此,IP可能具有治療OA的作用。
【關(guān)鍵詞】：indian hedgehog 骨關(guān)節(jié)炎 依普黃酮 細(xì)胞肥大 增殖 凋亡 生物力學(xué)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684.3
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表12-13
• 前言13-15
• 1 材料與方法15-34
• 1.1 一般資料15-17
• 1.2 研究方法17-33
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33-34
• 2 結(jié)果34-42
• 2.1 人OA軟骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察及表型鑒定34
• 2.2 IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞Ihh信號(hào)通路及細(xì)胞肥大分化基因影響的RT-PCR結(jié)果34-35
• 2.3 IP可以促進(jìn)OA軟骨細(xì)胞Col II蛋白表達(dá)，抑制MMP-13、COL X蛋白表達(dá)35-36
• 2.4 IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖、凋亡的影響36-37
• 2.5 微管吸吮分析IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞力學(xué)特性的影響37-38
• 2.6 番紅O-固綠染色顯示IP對(duì)OA軟骨組織塊蛋白多糖的影響38-39
• 2.7 IP體外干預(yù)人OA軟骨組織塊2天后的免疫熒光染色39-42
• 3 討論42-46
• 3.1 Ihh通路抑制劑—IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞肥大分化及軟骨組織降解的影響42-43
• 3.2 IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖、凋亡的影響43
• 3.3 IP對(duì)OA軟骨細(xì)胞生物力學(xué)性能的影響43-44
• 3.4 其他的Ihh信號(hào)通路抑制劑及相關(guān)治療藥物44
• 3.5 不足及展望44-46
• 4 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 綜述49-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果61-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63

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2 胡曉渝;鼠肝微粒體中依普黃酮濃度的測(cè)定及藥物體外代謝研究[D];浙江大學(xué);2002年

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本文編號(hào)：494267