發(fā)布時(shí)間：2017-06-09 23:05

  本文關(guān)鍵詞：基于基因芯片技術(shù)篩選創(chuàng)傷性股骨頭壞死特異性表達(dá)miRNA的試驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用高通量基因芯片檢測(cè)技術(shù)和real-time PCR技術(shù),篩選并驗(yàn)證調(diào)控創(chuàng)傷性股骨頭壞死發(fā)病的特異性miRNAs,利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)特異性miRNAs所調(diào)控的靶mRNA及相關(guān)信號(hào)通路,為下一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定前期研究基礎(chǔ)。方法:回顧性選取2013.1月-2013.12月期間因股骨頸骨折在河南省洛陽正骨醫(yī)院髖部損傷治療中心行手法復(fù)位經(jīng)皮空心螺紋釘內(nèi)固定術(shù)治療的患者,經(jīng)聯(lián)系后來院參與本次研究,簽署知情同意書。通過篩選期各項(xiàng)檢查,篩選出符合本次研究納入標(biāo)準(zhǔn)的患者10例,分成兩組:術(shù)后未發(fā)生股骨頭壞死者5例和術(shù)后已發(fā)生股骨頭壞死患者5例,采用高通量芯片技術(shù)檢測(cè)兩組患者血漿中miRNAs表達(dá)譜,篩選出與TIONFH發(fā)病事件相關(guān)的特異性表達(dá)miRNAs,通過real-time PCR驗(yàn)證篩選的差異miRNAs,通過生物信息學(xué)進(jìn)行分析預(yù)測(cè),獲得特異性表達(dá)miRNAs可能調(diào)控的靶基因及相關(guān)信號(hào)通路。結(jié)果:兩組患者對(duì)比共計(jì)篩選出來297個(gè)特異性miRNAs,其中表達(dá)上調(diào)35個(gè)和表達(dá)下調(diào)262個(gè)。通過Fold change和P-value篩選出表達(dá)最具有差異的2條上調(diào)和2條下調(diào)miRNAs。經(jīng)qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),術(shù)后壞死組患者血漿中的hsa-mi R-93-5p,hsa-let-7i-5p相比術(shù)后未壞死組患者表達(dá)增高,而hsa-miR-122-5p,hsa-miR-4711-3p則表達(dá)降低,與芯片結(jié)果一致。采用TargetScan、mirBase及miRanda三個(gè)在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)2條上調(diào)和2條下調(diào)miRNAs交集靶基因,上調(diào)部分中hsa-miR-93-5p預(yù)測(cè)到靶基因103個(gè),hsa-let-7i-5p預(yù)測(cè)到靶基因107個(gè);下調(diào)部分中hsa-miR-122-5p預(yù)測(cè)靶基因個(gè)數(shù)為31個(gè),而hsa-miR-4711-3p只在targetsca數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)到257個(gè)靶基因,其他兩個(gè)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)值為0。Go分析結(jié)果顯示:上調(diào)部分與細(xì)胞代謝、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、蛋白修飾及細(xì)胞間蛋白修飾密切相關(guān);下調(diào)調(diào)部分與定位、系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)發(fā)育及器官發(fā)育密切相關(guān)。Pathway分析結(jié)果顯示:上調(diào)部分與蛋白的結(jié)合,酶激活活性,蛋白激酶密切相關(guān);下調(diào)部分與蛋白和核酸結(jié)合活性和離子通道相關(guān)。結(jié)論:(1)兩組患者之間存在差異表達(dá)mi RNAs,這些miRNAs可能參與調(diào)控TIONFH的發(fā)生過程;(2)RT-PCR驗(yàn)證的差異表達(dá)2條上調(diào)和2條下調(diào)miRNAs,結(jié)果與芯片掃描結(jié)果一致;(3)這些差異表達(dá)miRNAs及其靶mRNA的進(jìn)一步研究將為TIONFH的早期診斷的潛在標(biāo)志物研究及下一步TIONFH骨修復(fù)過程中mi RNA調(diào)控機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：股骨頭壞死 miRNA 靶基因 通路
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.8
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表4-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 試驗(yàn)1 臨床資料收集13-16
• 對(duì)象與方法13-16
• 1 研究對(duì)象13
• 2 試驗(yàn)方法13
• 3 試驗(yàn)分組13
• 4 診斷標(biāo)準(zhǔn)13-15
• 4.1 中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)13
• 4.2 股骨頭壞死診斷標(biāo)準(zhǔn)13-14
• 4.3 納入標(biāo)準(zhǔn)14
• 4.4 排除標(biāo)準(zhǔn)14
• 4.5 脫落標(biāo)準(zhǔn)及剔除標(biāo)準(zhǔn)14
• 4.6 股骨頭壞死分期標(biāo)準(zhǔn)14-15
• 5 臨床資料收集15-16
• 試驗(yàn)2 特異性microRNAs篩選、驗(yàn)證及生物信息學(xué)預(yù)測(cè)16-21
• 材料與方法16-21
• 一、主要儀器16
• 二、主要材料、試劑16
• 三、試驗(yàn)方法16-21
• 1. 血漿樣本收集16-17
• 2. 血漿總RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)17
• 3. RNA瓊脂糖凝膠電泳17-18
• 4. RNA標(biāo)記與芯片雜交18-19
• 5. Real-timePCR法驗(yàn)證特異性表達(dá)microRNAs19-20
• 6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20-21
• 結(jié)果21-26
• 一、臨床資料收集21
• 二、RNA質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果21-22
• 三、探針分布情況22
• 四、miRNA的差異表達(dá)及篩選22-24
• 五、Go分析結(jié)果24
• 六、Pathway分析結(jié)果24-25
• 七、靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果25
• 八、基因定量結(jié)果25-26
• 討論26-34
• 1 祖國醫(yī)學(xué)對(duì)ONFH的認(rèn)識(shí)26-29
• 1.1 病名研究26
• 1.2 病因病機(jī)研究26-27
• 1.3 中醫(yī)學(xué)關(guān)于該病的治療現(xiàn)狀27-29
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)TIONFH的認(rèn)識(shí)29-32
• 2.1 股骨頭的血供與骨折移位程度30
• 2.2 復(fù)位的質(zhì)量30-31
• 2.3 治療時(shí)機(jī)與術(shù)后早期的負(fù)重情況31-32
• 2.4 其他因素32
• 3 microRNA與股骨頭壞死32-34
• 結(jié)論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 附錄1 知情同意書40-43
• 文獻(xiàn)綜述43-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 論文發(fā)表情況48

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：436863