本文關(guān)鍵詞：雌激素通過抑制破骨細(xì)胞促進(jìn)骨軟骨缺損的自發(fā)修復(fù)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的:隨著中國步入老齡化社會,骨關(guān)節(jié)炎的患者愈發(fā)增多,而對于中國這一批60歲以上的患者,由于年輕時大多從事了非常沉重的體力勞動,所以他們骨關(guān)節(jié)炎的病變程度非常嚴(yán)重,骨軟骨缺損的面積會比較大,甚至繼發(fā)軟骨下骨內(nèi)囊性空洞(也稱為囊腫)及關(guān)節(jié)面塌陷。對于這部分病人來說,口服鹽酸氨基葡萄糖或關(guān)節(jié)腔注射玻璃酸鈉等保守治療通常是無效的,而關(guān)節(jié)置換又費(fèi)用不菲,所以,探求一種新型的治療大面積骨軟骨缺損、防止出現(xiàn)囊性空洞及關(guān)節(jié)面塌陷的方法勢在必行。骨軟骨缺損的治療難點(diǎn)主要存在于軟骨的修復(fù),雖然廣大學(xué)者們嘗試了骨髓刺激、軟骨移植、軟骨細(xì)胞移植等多種方法,但軟骨層的遠(yuǎn)期修復(fù)療效依然不能令人滿意。以往研究者們還從事了大量雌激素替代療法防治絕經(jīng)后婦女骨關(guān)節(jié)炎的研究,雖然可以改善關(guān)節(jié)疼痛的癥狀,但尚無確切證據(jù)證明雌激素可以促進(jìn)軟骨的再生。隨著軟骨組織工程技術(shù)的興起,在各式各樣的生物可降解性支架中加入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的生長因子同時,應(yīng)用雌激素能否促進(jìn)組織工程技術(shù)修復(fù)骨軟骨缺損,對于其可行性尚缺乏足夠的基礎(chǔ)實驗證據(jù)。軟骨下骨內(nèi)囊性空洞即可先于骨軟骨缺損出現(xiàn)也可以出現(xiàn)在骨軟骨缺損后,針對已發(fā)生骨軟骨缺損的治療,在修復(fù)過程中如何防止囊性空洞的形成,首先要弄清楚其形成的原因。迄今為止,眾多學(xué)者從事了大量相關(guān)方面的研究,關(guān)于囊腫的形成機(jī)制主要有兩種學(xué)說相持不下:(1)高壓狀態(tài)下關(guān)節(jié)滑液的侵入,(2)局部骨質(zhì)代謝異常導(dǎo)致的骨吸收增強(qiáng)。破骨細(xì)胞作為骨吸收代謝的核心,目前關(guān)于破骨細(xì)胞與骨軟骨缺損后修復(fù)過程中囊性空洞形成關(guān)系的研究報道較少;雌激素作為破骨細(xì)胞的調(diào)控因子,其對囊性空洞的發(fā)生是否有影響也鮮有報道。綜上,本實驗以囊性空洞的形成原因為切入點(diǎn),研究破骨細(xì)胞在骨軟骨缺損后自發(fā)修復(fù)過程中及軟骨下骨內(nèi)囊性空洞形成中所起的作用,同時通過大鼠去勢及注射雌激素調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的活性,探討雌激素對骨軟骨缺損自發(fā)修復(fù)的影響,為雌激素在軟骨組織工程學(xué)中的應(yīng)用提供依據(jù)。研究方法:一、去勢大鼠骨軟骨缺損模型的建立4.動物分組:本實驗選用SD(sprague dawley)大鼠作為模型,因為其對性激素敏感性高,且體型大于小鼠,方便做卵巢切除及輸卵管結(jié)扎等操作,是目前國際上做去勢研究常用的動物模型。健康雌性4月齡SD大鼠72只,體重210~250g,隨機(jī)分為陰性對照組(A組)、去卵巢組(B組)和去卵巢+雌激素的治療組(C組)。5.制備模型:取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的戊巴比妥鈉酒精溶液,每只大鼠按0.1ml/100g腹腔注射麻醉后,取雙側(cè)腰背部縱行入路,B、C組分離并切除雙側(cè)卵巢,A組在卵巢周圍切除相同質(zhì)量的脂肪,術(shù)后C組大鼠每周按0.4ml/100g經(jīng)腹腔注射0.025mg/ml的苯甲酸雌二醇一次;4周后,相同方法麻醉大鼠后,經(jīng)膝關(guān)節(jié)髕韌帶內(nèi)側(cè)入路,在股骨滑車上鉆出全層骨軟骨缺損(直徑約2mm、深約1.5mm)。二、雌激素對骨軟骨缺損修復(fù)的影響1.標(biāo)本取材:分別在造模后第2、10、20周,每組各有8只大鼠被隨機(jī)選出,過量注射戊巴比妥鈉酒精溶液致死,取下股骨髁,隨機(jī)挑選一半標(biāo)本放入-80℃冰箱中保存待用,另一半放入中性甲醛溶液中固定。2.Micro-CT掃描觀察及分析:固定好的標(biāo)本置于Micro-CT機(jī)中,以骨軟骨缺損處為中心行股骨髁矢狀面掃描并觀察,并在缺損區(qū)軟骨下骨內(nèi)選擇感興趣區(qū)進(jìn)行重建,并行軟骨下骨骨質(zhì)微結(jié)構(gòu)分析。3.標(biāo)本脫鈣切片行HE染色及番紅O-固綠染色并觀察形態(tài)學(xué)變化:股骨髁脫鈣后石蠟包埋切片,切片厚度5μm,分別行HE染色及番紅O-固綠染色后置于光學(xué)顯微鏡下觀察缺損區(qū)形態(tài)學(xué)變化。三、破骨細(xì)胞數(shù)量活性變化及所起的作用1.抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色:切片經(jīng)TRAP染色后觀察破骨細(xì)胞分布情況并計數(shù)缺損區(qū)軟骨下骨內(nèi)破骨細(xì)胞的數(shù)量。2.MMP-9免疫組化染色:微波抗原修復(fù)后,使用超敏二步法行免疫組化染色,觀察MMP-9陽性細(xì)胞的分布情況。3.Real-time PCR檢測目的基因表達(dá)情況:通過對比各組檢測MMP-9、RANKL、OPG表達(dá)的相對值,明確破骨細(xì)胞活性的高低及變化情況。實驗結(jié)果:一、雌激素可促進(jìn)骨軟骨缺損的修復(fù)3.在缺損修復(fù)的早期即第2周時,A、C兩組軟骨內(nèi)成骨更快,生成的骨樣基質(zhì)更多。4.在缺損修復(fù)的中晚期即第10、20周時,各組均未見軟骨層再生,但雌激素水平高的A、C兩組骨質(zhì)修復(fù)質(zhì)量更高,不會像B組一樣出現(xiàn)軟骨下骨內(nèi)骨囊腫、軟骨下骨板裂縫及關(guān)節(jié)面塌陷。二、破骨細(xì)胞在骨軟骨缺損修復(fù)中的作用1.在缺損修復(fù)的早期,破骨細(xì)胞主要參與骨質(zhì)修復(fù)的重構(gòu)。2.在缺損修復(fù)的中晚期,B組破骨細(xì)胞數(shù)量及活性過高,促使軟骨下骨板出現(xiàn)裂縫,并同經(jīng)裂縫侵入的關(guān)節(jié)滑液一起導(dǎo)致了軟骨下骨內(nèi)囊性空洞的形成,而A、C兩組無類似病變。結(jié)論:在去卵巢大鼠軟骨骨缺損自發(fā)修復(fù)模型中,去勢造成破骨細(xì)胞活性增高,導(dǎo)致軟骨下骨板裂縫形成、軟骨下骨內(nèi)囊性空洞出現(xiàn);注射雌激素(苯甲酸雌二醇)可抑制破骨細(xì)胞活性并促進(jìn)軟骨內(nèi)成骨,改善再生軟骨下骨的質(zhì)量,防止出現(xiàn)軟骨下骨板裂縫及囊性空洞,為軟骨修復(fù)提供良好的軟骨下骨基礎(chǔ),在未來可應(yīng)用于組織工程技術(shù)治療骨軟骨缺損。
【關(guān)鍵詞】：骨軟骨缺損 雌激素 破骨細(xì)胞 囊性空洞
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R687;R318.08
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• Abstract5-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 雌激素對骨軟骨缺損修復(fù)的影響14-29
• 2.1 材料與方法14-20
• 2.2 結(jié)果20-28
• 2.3 討論28-29
• 第三章 破骨細(xì)胞在骨軟骨缺損修復(fù)過程中所起的作用29-39
• 3.1 材料與方法29-33
• 3.2 結(jié)果33-37
• 3.3 討論37-39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 文獻(xiàn)綜述 骨軟骨缺損后軟骨下骨的繼發(fā)性改變42-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 攻讀碩士期間所發(fā)表的論文51-52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 服部高子 ,李軍;干細(xì)胞移植修復(fù)軟骨缺損的研究[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2003年02期

2 張積禮;武U

本文編號：410318