本文關(guān)鍵詞：黃原膠抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過(guò)體內(nèi)和體外評(píng)價(jià)黃原膠(Xanthan Gum,XG)對(duì)骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞凋亡的抑制作用及其機(jī)制,為開(kāi)發(fā)新一代治療骨關(guān)節(jié)炎新藥提供理論及數(shù)據(jù)支持。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用前交叉韌帶切斷術(shù)(Anterior Cruciate Ligament Transaction,ACLT)建立體內(nèi)骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)模型,并給予XG和玻璃酸鈉(Sodium Hyaluronate,SH)干預(yù),記錄家兔體溫度、膝關(guān)節(jié)腔溫度和膝關(guān)節(jié)寬度;術(shù)后第9周處死,對(duì)股骨髁和脛骨平臺(tái)軟骨做大體形態(tài)學(xué)及組織學(xué)觀察及評(píng)分,與SH組相比較,評(píng)價(jià)XG對(duì)ACLT誘導(dǎo)的OA軟骨的保護(hù)作用;用Western-blot測(cè)定關(guān)節(jié)軟骨中,細(xì)胞凋亡蛋白酶3(caspase-3)、細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Bax和凋亡抑制因子Bcl-2等蛋白的表達(dá);初步探討XG抑制ACLT誘導(dǎo)的兔OA模型軟骨凋亡的機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)通過(guò)培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,分離培養(yǎng)并鑒定,采用(0.0625~2 mmol/L)硝普鈉(Sodium Nitriprusside,SNP)誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡,分別于12、24、48 h采用四甲基偶氮唑鹽比色試驗(yàn)法(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium-bromide,MTT)和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移的d UTP缺口末端標(biāo)記法評(píng)價(jià)并比較不同濃度SNP誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡模型。在確定體外模型制備的參數(shù)后,首先經(jīng)XG和SH預(yù)處理,再經(jīng)SNP誘導(dǎo)24 h,采用MTT,流式,掃描電鏡,羅丹明123染色和ELISA等方法檢測(cè)細(xì)胞增殖,凋亡率,受損形態(tài),以及線粒體膜電位的改變和前列腺素E2的含量;與SH組相比較評(píng)價(jià)XG對(duì)SNP誘導(dǎo)的OA軟骨細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用;對(duì)Caspase-3,Bax和Bcl-2等相關(guān)因子的蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),初步探討XG抑制SNP誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制。結(jié)果體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:兔膝關(guān)節(jié)腔注射劑量為1%和2%的XG可保護(hù)軟骨;與SH組相比無(wú)顯著性差異;且1%和2%的XG可通過(guò)影響軟骨Caspase-3、Bax和Bcl-2等因子參與細(xì)胞凋亡的過(guò)程。原代培養(yǎng)的細(xì)胞可分泌糖胺聚糖以及Ⅱ型膠原等軟骨細(xì)胞特異性成分,該細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。采用SNP建立凋亡模型中,不同濃度在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)軟骨細(xì)胞的凋亡均產(chǎn)生影響,其中0.25、0.5、1、2mmol/L處理軟骨細(xì)胞12、24、48 h時(shí)兔軟骨細(xì)胞凋亡率均高于SNP濃度為0mmol/L(P0.05);藥效學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果表明:XG能保護(hù)體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞,促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖,與NS組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);XG(500~2000μg/m L)可抑制軟骨細(xì)胞凋亡率,0.5 mmol/LSNP處理組凋亡率接近50%。XG(10,100,500,1000,2000μg/m L)和SH(1 000μg/m L)預(yù)處理的軟骨細(xì)胞其凋亡率分別為25.88%,28.26%,16.67%,12.78%,8.52%,12.75%。XG(100~2000μg/m L)能維持OA中軟骨細(xì)胞形態(tài),0.5 mmol/LSNP處理組細(xì)胞皺縮,失去軟骨細(xì)胞固有形態(tài)。XG濃度為100μg/m L組,軟骨細(xì)胞形態(tài)較硝普鈉0.5 mmol/L處理組有所改變,但仍出現(xiàn)細(xì)胞皺縮,且細(xì)胞膜破損,整個(gè)軟骨細(xì)胞出現(xiàn)腫塊;XG也可對(duì)線粒體膜電位產(chǎn)生影響,其熒光強(qiáng)度隨XG劑量的增加逐漸增強(qiáng);與SNP組相比,XG和SH可降低PGE2的含量(P0.01)。此外,XG可通過(guò)調(diào)節(jié)Caspase-3、Bax和Bcl-2的表達(dá)來(lái)抑制軟骨細(xì)胞凋亡。結(jié)論(1)兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射XG(1%)和XG(2%)可保護(hù)OA中的軟骨,抑制軟骨細(xì)胞凋亡,緩解疼痛;(2)SNP濃度為0.3~2 mmol/L且誘導(dǎo)12、24和48 h可制備不同嚴(yán)重程度的軟骨細(xì)胞凋亡模型,成功率高,穩(wěn)定且可重復(fù);(3)XG可對(duì)體外SNP誘導(dǎo)OA中軟骨細(xì)胞具有保護(hù)作用,可通過(guò)調(diào)控Capsase-3,Bax和Bcl-2來(lái)抑制軟骨細(xì)胞凋亡保護(hù)軟骨進(jìn)而緩解OA進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：黃原膠 骨關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 凋亡 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R684.3
【目錄】：

• 中文論著摘要5-7
• 英文論著摘要7-10
• 英文縮略語(yǔ)表10-11
• 前言11-15
• 第一章 黃原膠抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨凋亡及其作用機(jī)制的體內(nèi)研究15-29
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-20
• 結(jié)果20-27
• 討論27-28
• 結(jié)論28-29
• 第二章 黃原膠抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制的體外研究29-48
• 第一節(jié) 硝普鈉誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎體外模型的研究29-39
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法30-33
• 結(jié)果33-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 第二節(jié) 黃原膠抑制硝普鈉誘導(dǎo)兔軟骨細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究39-48
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法39-41
• 結(jié)果41-46
• 討論46-47
• 結(jié)論47-48
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 文獻(xiàn)綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 在學(xué)期間科研成績(jī)64-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)介66-67

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本文編號(hào)：404872