第一部分 滇南小耳豬PBMSCs的動(dòng)員、體外培養(yǎng)與鑒定[目的]探討滇南小耳豬外周血源性間充質(zhì)干細(xì)胞(PBMSCs)的最佳動(dòng)員方法,并對(duì)其生物學(xué)特性、多向分化能力進(jìn)行鑒定,為后續(xù)用于種子細(xì)胞實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。[方法](1)使用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)與AMD3100雙因子動(dòng)員滇南小耳豬外周血源性間充質(zhì)干細(xì)胞(PBMSCs),并分為4組:A組(G-CSF組)、B 組(AMD3100 組)、C 組(G-CSF+AMD3100 組)、D 組(空白對(duì)照組);(2)采用密度梯度離心及貼壁法培養(yǎng)PBMSCs,觀察細(xì)胞形態(tài),通過(guò)成纖維細(xì)胞集落形成培養(yǎng)法(CFU-F)檢測(cè)集落形成及流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD45-CD90+細(xì)胞群比例,探討最佳動(dòng)員方法;(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)最佳動(dòng)員后獲得的P2 PBMSCs CD44、CD90、CD34、CD45的表達(dá);并取P2 PBMSCs行成骨、成軟骨、成脂誘導(dǎo)分化,分別用茜素紅、阿利新藍(lán)、油紅O染色檢測(cè)PBMSCs多向分化能力。[結(jié)果](1)G-CSF+AMD3100動(dòng)員組獲取的外周血標(biāo)本培養(yǎng)7d后見(jiàn)較多短梭形及多角形細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),培養(yǎng)10d后見(jiàn)貼壁細(xì)胞明顯呈集落樣生長(zhǎng);...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１：?ＰＢＭＳＣｓ原代培養(yǎng)ａ：Ｇ－ＣＳＦ＋ＡＭＤ３１０呈（ｘｌＯＯ）；ｂ：?Ｇ－ＣＳＦ＋ＡＭＤ３

；ｗｉ．Ｂ＊??ＰＢ?ＣＦＵ－Ｆｓ??圖１－２：?Ｇ－ＣＳＦ、ＡＭＤ３１００對(duì)ＭＳＣｓ的動(dòng)員作用結(jié)果??２５??

圖１－３各組流式細(xì)胞儀檢測(cè)ＣＤ４５－ＣＤ９０＋細(xì)胞群比例結(jié)果??

細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示：傳代后ＰＢＭＳＣｓ生長(zhǎng)均一穩(wěn)定，呈長(zhǎng)梭形，旋渦樣排??列（圖ｌ－４ａ，ｂ），第二代ＰＢＭＳＣｓ生長(zhǎng)曲線表明：接種后１－２天細(xì)胞處于生長(zhǎng)潛伏??期，３－５天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，接種６－７天后進(jìn)入平臺(tái)期，呈“Ｓ”形（

圖１４：?ＰＢＭＳＣｓ傳代培養(yǎng)ａ：第二代ＰＢＭＳＣｓ培養(yǎng)７天細(xì)胞形態(tài)與原代相似，呈梭??形（ｘｌ〇〇）；?ｂ：ＰＢＭＳＣｓ７呈，（ｘｌ〇〇）

充質(zhì)干細(xì)胞增殖形態(tài)類(lèi)似。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果表明：細(xì)胞表面造血系標(biāo)記ＣＤ３４、??ＣＤ４５陰性，而ＣＤ４４、ＣＤ９０強(qiáng)陽(yáng)性，符合間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性（圖１－６）。??多向分化能力檢測(cè)顯示：ＰＢＭＳＣｓ在成骨誘導(dǎo)液作用下，１周時(shí)細(xì)胞開(kāi)始聚集，??增殖速度明顯減慢，隨后在鏡下可見(jiàn)結(jié)節(jié)....

圖１－７?Ｐ２ＰＢＭＳＣｓ成骨、成軟骨、成脂誘導(dǎo)分化

本文編號(hào)：4019693