目的:富氫水（Hydrogen-rich solution,HRS）是弱堿性的,有一個(gè)負(fù)電位并包含小分子水,具有很強(qiáng)的抗炎、抗氧化應(yīng)激和抗凋亡特性。HRS在大腦、肝臟和腸的抗缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護(hù)作用,然而,它的潛在的治療機(jī)制仍有待確認(rèn)。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（Phosphatidyl inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）信號(hào)通路在心肌缺血再灌注損傷保護(hù)機(jī)制的調(diào)控中扮演著重要的角色。體外循環(huán)（Cardiopulmonary bypass,CPB）導(dǎo)致心肌損傷的機(jī)制尚不完全清楚,水通道蛋白（Aquaporin,AQP）在心肌表達(dá)的生理意義及HRS通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)CPB心肌損傷的影響尚缺乏全面統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。本研究擬用無(wú)血預(yù)充大鼠CPB伴心臟停跳（Cardioplegic arrest,CA）模型,觀察CPB后心肌含水量、心肌損傷指標(biāo)、炎性介質(zhì)、抗氧化能力及AQP-1,4蛋白表達(dá)的變化,從細(xì)胞、分子和基因水平上探討CPB對(duì)心肌損傷的發(fā)生機(jī)制和HRS通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)CPB后心肌保護(hù)的可行性,為探索CPB期間心肌...

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 ：體外循環(huán)對(duì)大鼠心肌損傷的影響及機(jī)制探討
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 建立大鼠無(wú)血預(yù)充體外循環(huán)伴心臟停跳模型
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理
            2.2.3 標(biāo)本采集與處理
            2.2.4 心肌含水量的測(cè)定
            2.2.5 血漿cTnI、hFABP濃度變化
            2.2.6 血漿TNF–α、IL–6和IL–10濃度的測(cè)定
            2.2.7 血漿8-iso-PGF2α水平的測(cè)定
            2.2.8 心肌組織丙二醛(MDA)含量、髓過(guò)氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性測(cè)定
            2.2.9 心肌形態(tài)學(xué)觀察
            2.2.10 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達(dá)
            2.2.11 Western blot檢測(cè)心肌組織中AQP-1和AQP-4蛋白的表達(dá)
            2.2.12 Real-Time PCR檢測(cè)心肌組織AQP-1、AQP-4 mRNA表達(dá)
            2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大鼠的一般情況
        3.2 各組大鼠心肌損傷指標(biāo)的變化
            3.2.1 大鼠心肌含水量的變化
            3.2.2 血漿cTnI、hFABP濃度變化
        3.3 血漿TNF-α、IL-6和IL-10濃度變化
            3.3.1 血漿TNF-α、IL-6濃度
            3.3.2 血漿IL-10濃度
        3.4 血漿8-iso-PGF2α水平的測(cè)定
        3.5 心肌組織丙二醛(MDA)含量,髓過(guò)氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化
            3.5.1 心肌組織MDA含量和MPO活性
            3.5.2 心肌組織SOD活性
        3.6 大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)改變
            3.6.1 HE染色光鏡觀察
            3.6.2 透射電鏡觀察
        3.7 各組大鼠心肌組織水通道蛋白表達(dá)的變化
            3.7.1 免疫組化檢測(cè)心肌組織AQP-1蛋白分布與表達(dá)
            3.7.2 免疫組化檢測(cè)心肌組織AQP-4蛋白表達(dá)
            3.7.3 Western blot檢測(cè)心肌水通道蛋白表達(dá)
            3.7.4 Real-Time PCR檢測(cè)AQP水通道蛋白mRNA表達(dá)
        3.8 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達(dá)變化與心肌損傷的關(guān)系
            3.8.1 心肌組織AQP-1,4蛋白表達(dá)變化與心肌含水量的關(guān)系
            3.8.2 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達(dá)變化與血漿cTnI、hFABP濃度的關(guān)系
        3.9 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達(dá)變化與炎癥介質(zhì)的關(guān)系
        3.10 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達(dá)變化與過(guò)氧化損傷的關(guān)系
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 ：富氫水對(duì)體外循環(huán)大鼠心肌保護(hù)作用及機(jī)制探討
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 大鼠體外循環(huán)伴心臟停跳模型制備
            2.2.2 HRS的制備
            2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及取材
            2.2.4 血流動(dòng)力學(xué)改變檢測(cè)
            2.2.5 大鼠心肌含水量測(cè)定
            2.2.6 蘇木精-伊紅(HE)染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化
            2.2.7 Masson染色
            2.2.8 ELISA檢測(cè)
            2.2.9 TUNEL試驗(yàn)
            2.2.10 Western blot檢測(cè)
            2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大鼠血流動(dòng)力學(xué)的變化
        3.2 大鼠心肌含水量變化
        3.3 HRS改善CPB大鼠心肌損傷
            3.3.1 HE染色光鏡觀察
            3.3.2 Masson三色染色光鏡觀察
            3.3.3 ELISA檢測(cè)心肌損傷相關(guān)因子變化
        3.4 ELISA檢測(cè)大鼠的氧化應(yīng)激相關(guān)因子和炎癥因子分泌
        3.5 TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.6 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、AQPs蛋白及PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 ：富氫水通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路改善體外循環(huán)大鼠心肌損傷
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 大鼠體外循環(huán)伴心臟停跳模型制備
            2.2.2 HRS的制備
            2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及取材
            2.2.4 大鼠心肌含水量測(cè)定
            2.2.5 ELISA檢測(cè)
            2.2.6 Masson染色
            2.2.7 TUNEL實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 Western blot檢測(cè)
            2.2.9 細(xì)胞模型建立
            2.2.10 MTT比色法
            2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大鼠心肌含水量變化
        3.2 ELISA檢測(cè)心肌損傷相關(guān)因子、氧化應(yīng)激相關(guān)因子和炎癥因子變化
        3.3 Masson三色染色光鏡觀察
        3.4 TUNEL試驗(yàn)檢測(cè)各組大鼠細(xì)胞凋亡
        3.5 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組大鼠細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、AQP蛋白及PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)
        3.6 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞活力
        3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.8 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)心肌細(xì)胞細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、AQP蛋白及PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4016202