目的:富氫水（Hydrogen-rich solution,HRS）是弱堿性的,有一個負電位并包含小分子水,具有很強的抗炎、抗氧化應激和抗凋亡特性。HRS在大腦、肝臟和腸的抗缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護作用,然而,它的潛在的治療機制仍有待確認。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（Phosphatidyl inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）信號通路在心肌缺血再灌注損傷保護機制的調控中扮演著重要的角色。體外循環(huán)（Cardiopulmonary bypass,CPB）導致心肌損傷的機制尚不完全清楚,水通道蛋白（Aquaporin,AQP）在心肌表達的生理意義及HRS通過PI3K/Akt信號通路對CPB心肌損傷的影響尚缺乏全面統(tǒng)一的認識。本研究擬用無血預充大鼠CPB伴心臟停跳（Cardioplegic arrest,CA）模型,觀察CPB后心肌含水量、心肌損傷指標、炎性介質、抗氧化能力及AQP-1,4蛋白表達的變化,從細胞、分子和基因水平上探討CPB對心肌損傷的發(fā)生機制和HRS通過PI3K/Akt信號通路對CPB后心肌保護的可行性,為探索CPB期間心肌...

【文章頁數】：125 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 ：體外循環(huán)對大鼠心肌損傷的影響及機制探討
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設備
            2.1.3 實驗動物
        2.2 實驗方法
            2.2.1 建立大鼠無血預充體外循環(huán)伴心臟停跳模型
            2.2.2 實驗分組及處理
            2.2.3 標本采集與處理
            2.2.4 心肌含水量的測定
            2.2.5 血漿cTnI、hFABP濃度變化
            2.2.6 血漿TNF–α、IL–6和IL–10濃度的測定
            2.2.7 血漿8-iso-PGF2α水平的測定
            2.2.8 心肌組織丙二醛(MDA)含量、髓過氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性測定
            2.2.9 心肌形態(tài)學觀察
            2.2.10 免疫組織化學法檢測心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達
            2.2.11 Western blot檢測心肌組織中AQP-1和AQP-4蛋白的表達
            2.2.12 Real-Time PCR檢測心肌組織AQP-1、AQP-4 mRNA表達
            2.2.13 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 大鼠的一般情況
        3.2 各組大鼠心肌損傷指標的變化
            3.2.1 大鼠心肌含水量的變化
            3.2.2 血漿cTnI、hFABP濃度變化
        3.3 血漿TNF-α、IL-6和IL-10濃度變化
            3.3.1 血漿TNF-α、IL-6濃度
            3.3.2 血漿IL-10濃度
        3.4 血漿8-iso-PGF2α水平的測定
        3.5 心肌組織丙二醛(MDA)含量,髓過氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化
            3.5.1 心肌組織MDA含量和MPO活性
            3.5.2 心肌組織SOD活性
        3.6 大鼠心肌組織形態(tài)學改變
            3.6.1 HE染色光鏡觀察
            3.6.2 透射電鏡觀察
        3.7 各組大鼠心肌組織水通道蛋白表達的變化
            3.7.1 免疫組化檢測心肌組織AQP-1蛋白分布與表達
            3.7.2 免疫組化檢測心肌組織AQP-4蛋白表達
            3.7.3 Western blot檢測心肌水通道蛋白表達
            3.7.4 Real-Time PCR檢測AQP水通道蛋白mRNA表達
        3.8 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達變化與心肌損傷的關系
            3.8.1 心肌組織AQP-1,4蛋白表達變化與心肌含水量的關系
            3.8.2 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達變化與血漿cTnI、hFABP濃度的關系
        3.9 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達變化與炎癥介質的關系
        3.10 心肌組織AQP-1、AQP-4蛋白表達變化與過氧化損傷的關系
    4 討論
    5 結論
第二部分 ：富氫水對體外循環(huán)大鼠心肌保護作用及機制探討
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設備
            2.1.3 實驗動物
        2.2 實驗方法
            2.2.1 大鼠體外循環(huán)伴心臟停跳模型制備
            2.2.2 HRS的制備
            2.2.3 實驗分組及取材
            2.2.4 血流動力學改變檢測
            2.2.5 大鼠心肌含水量測定
            2.2.6 蘇木精-伊紅(HE)染色觀察心肌組織形態(tài)學變化
            2.2.7 Masson染色
            2.2.8 ELISA檢測
            2.2.9 TUNEL試驗
            2.2.10 Western blot檢測
            2.2.11 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 大鼠血流動力學的變化
        3.2 大鼠心肌含水量變化
        3.3 HRS改善CPB大鼠心肌損傷
            3.3.1 HE染色光鏡觀察
            3.3.2 Masson三色染色光鏡觀察
            3.3.3 ELISA檢測心肌損傷相關因子變化
        3.4 ELISA檢測大鼠的氧化應激相關因子和炎癥因子分泌
        3.5 TUNEL實驗檢測細胞凋亡
        3.6 Western blot實驗檢測細胞凋亡相關蛋白、AQPs蛋白及PI3K/Akt信號通路相關蛋白表達
    4 討論
    5 結論
第三部分 ：富氫水通過PI3K/Akt信號通路改善體外循環(huán)大鼠心肌損傷
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設備
            2.1.3 實驗動物
            2.1.4 實驗細胞
        2.2 實驗方法
            2.2.1 大鼠體外循環(huán)伴心臟停跳模型制備
            2.2.2 HRS的制備
            2.2.3 實驗分組及取材
            2.2.4 大鼠心肌含水量測定
            2.2.5 ELISA檢測
            2.2.6 Masson染色
            2.2.7 TUNEL實驗
            2.2.8 Western blot檢測
            2.2.9 細胞模型建立
            2.2.10 MTT比色法
            2.2.11 流式細胞術檢測凋亡
            2.2.12 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 大鼠心肌含水量變化
        3.2 ELISA檢測心肌損傷相關因子、氧化應激相關因子和炎癥因子變化
        3.3 Masson三色染色光鏡觀察
        3.4 TUNEL試驗檢測各組大鼠細胞凋亡
        3.5 Western blot實驗檢測各組大鼠細胞凋亡相關蛋白、AQP蛋白及PI3K/Akt信號通路相關蛋白表達
        3.6 MTT實驗檢測各組細胞活力
        3.7 流式細胞術檢測細胞凋亡
        3.8 Western blot實驗檢測心肌細胞細胞凋亡相關蛋白、AQP蛋白及PI3K/Akt信號通路相關蛋白表達
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4016202