目的：脊髓損傷引起的炎癥反應(yīng)是造成脊髓功能難以恢復(fù)的重要原因，而損傷局部小膠質(zhì)細(xì)胞和外周浸潤的巨噬細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)固有免疫-炎癥反應(yīng)的基本組成成分。研究表明,SOCS3基因參與多種體內(nèi)炎癥反應(yīng),并影響脊髓損傷功能預(yù)后。但SOCS3對于脊髓損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用尚不明確。本研究旨在利用神經(jīng)系統(tǒng)或骨髓源細(xì)胞譜系條件性敲除SOCS3基因的小鼠，研究基因敲除對脊髓損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞極化作用的影響,以及對損傷脊髓髓鞘再生、軸突生長及功能恢復(fù)等方面的作用并探討其機(jī)制。方法：(1)通過鼠尾鑒定的方法培育篩選出基因型為Socs3fl/fl Nes ere(神經(jīng)系統(tǒng)條件性敲除socs3,40只)、Socs3fl/fl LysM ere(骨髓源細(xì)胞譜系條件性敲除Socs3,40只)及Socs3fl(無socs3敲除,40只)的小鼠。分別為作為敲除組1,敲除組2和對照組。鉗夾法制作脊髓損傷模型,在損傷后1、3、7、14天取損傷組織。熒光定量RT-PCR法檢測各時間點巨噬細(xì)胞分型標(biāo)志分子及SOCS3信號通路分子的基因表達(dá)：免疫熒光共染色法檢測脊髓損傷部位巨噬細(xì)胞M1及M2分型標(biāo)志蛋白，以...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．鼠尾基因的鑒定和分組方法示意圖（Ｍａｒｋｅｒ略）??－－－

本文從略。ＰＣＲ體系中使用Ｐｒｅｍｉｘ?Ｔａｑ？?（ＴａＫａＲａ?Ｔａｑ？?Ｖｅｒｓｉｏｎ?２．０??ｐｌｕｓ?ｄｙｅ）ＰＣＲ預(yù)混試劑。根據(jù)發(fā)光呈像系統(tǒng)顯示ＰＣＲ結(jié)果分析小鼠基因型（如??圖１），同一動物鑒定為雙鏈ｓｏｃｓ３－ｌｏｘｐ且Ｎｅｓ－ｃｒｅ陽性時，其基因型為５ｂｃｓ滬?....

圖６脊髓損傷后３天Ｓｏｃｓ３表達(dá)情況（免疫巧光染色，Ｘ２０）??Ａ、Ｂ、Ｃ分別為脊粗損傷后３天對照組、敲除組１、敲除組２中Ｓｏｃｓ３染色（緣色）結(jié)??

ｒｇｉｎａｓｅｌ、ＣＤ２０６，綠色），Ｍｌ標(biāo)志物（０）８６、ＣＤ１６，綠色）的免疫巧光共染色Ａ－Ｄ為分別為對照組中比ａｌ與Ａｒｇｉｎａｓｅｌ、ＣＤ２０６、ＣＤ８６、ＣＤ１６巧染，Ｅ－Ｈ為中上述抗體染色結(jié)果，Ｉ－Ｌ為敲除組２中上述抗體染色結(jié)果。標(biāo)尺＝１００?Ｍ?ｍ。Ｍ－后３、７、１....

圖７脊髓損傷后１４周皮質(zhì)脊髓束的巧死與出芽??Ａ、Ｂ分別為對照組小鼠及巧除組小鼠ＣＳＴ損傷段脊巧，紅色為ＣＳＴ示蹤情況，綠色為??ＧＦＡＰ染色，用Ｗ確定損傷近端膠質(zhì)巧痕與損傷核也區(qū)界限（虛線所示）

圖７脊髓損傷后１４周皮質(zhì)脊髓束的巧死與出芽??Ａ、Ｂ分別為對照組小鼠及巧除組小鼠ＣＳＴ損傷段脊巧，紅色為ＣＳＴ示蹤情況，綠色為??ＧＦＡＰ染色，用Ｗ確定損傷近端膠質(zhì)巧痕與損傷核也區(qū)界限（虛線所示）。如圖所見??化Ｓ－ＳＯＣＳ３－／－組神經(jīng)束與損傷界限距離縮短。左倆均為頭側(cè)，上方為....

圖８損傷后１４周脊巧盧卡斯快藍(lán)染色結(jié)果??Ａ為對照紀(jì)小鼠，Ｂ為敲除組小鼠，箭頭指示損傷中必背側(cè)殘存的髓銷

染范圍大于對照組，損傷灶藍(lán)染缺失區(qū)域較對照組明顯巧少。損傷中屯、背側(cè)有連??續(xù)性藍(lán)染區(qū)域自近端貫通至遠(yuǎn)端。說明敲除組殘存及再生的髓銷較對照組明顯增??ｈ?多。具體見圖８．??Ｉ??

本文編號：4006509