目的:慢性排斥反應是導致遠期移植物功能衰竭的主要原因。移植物動脈硬化是不同移植物慢性排斥反應中共有的組織病理學特征。血管平滑肌細胞(SMC)表型轉化是調節(jié)移植物動脈新生內(nèi)膜形成及動脈硬化的起始及進展的關鍵環(huán)節(jié)。本研究旨在探索轉錄因子Sox9在移植損傷誘導的移植物動脈SMC表型轉化中的作用及其潛在的分子機制。方法:用短發(fā)夾RNA(shRNA)慢病毒載體特異性地敲低移植動脈中膜SMC中靶基因的轉錄表達,并建立大鼠動脈移植模型。采用H&E及EVG染色對移植動脈進行形態(tài)學分析,采用基因轉錄組測序篩選與移植動脈SMC分化,增殖等相關的差異基因,并用免疫組織化學,組織熒光染色及蛋白免疫印跡(western blotting)檢測移植動脈中Sox9,血管SMC分化標志基因(Calponin和SM22α),自噬相關分子(Atg5,Atg7,Beclin-1,LC3Ⅰ/Ⅱ等)及增殖細胞核抗原(PCNA)的表達水平。在體外,培養(yǎng)大鼠動脈SMC,給予藥物刺激,shRNA慢病毒感染及質粒轉染,實時定量PCR(qRT-PCR)及western blotting定量細胞內(nèi)相關分子的mRNA及蛋白表達。免疫...

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