目的:研究葫蘆素B(Cucurbitacin B,CuB)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。方法:采用不同濃度的CuB處理骨肉瘤細(xì)胞,結(jié)晶紫染色、MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;Hoechst 33258染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期;劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室法分析細(xì)胞遷移與侵襲能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin和Snail等遷移與侵襲相關(guān)標(biāo)志物的mRNA和蛋白水平;Western Blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Cyclin B1和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bad、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的表達(dá);熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)腫瘤相關(guān)信號(hào)途徑的活性,Western Blot檢測(cè)MAPK信號(hào)及AKT信號(hào)的變化。構(gòu)建骨肉瘤異位移植瘤模型,觀察瘤體生長(zhǎng)情況,HE染色分析骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移情況,免疫組織化學(xué)染色分析Bcl-2、N-cadherin和PCNA表達(dá)及p-ERK水平。結(jié)果:CuB可抑制骨肉瘤細(xì)胞的增...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1CuB抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖能力Figure1.1CuBinhibitedtheproliferativeabilityofosteosarcomacells.A、B：結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)；C：MTT實(shí)驗(yàn)；D、E：克隆形成試驗(yàn)；F：蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)

圖1.1CuB抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖能力Figure1.1CuBinhibitedtheproliferativeabilityofosteosarcomacells.A、B：結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)；C：MTT實(shí)驗(yàn)；D、E：克隆形成試驗(yàn)；F：蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)。*P＜0.....

圖1.2CuB誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡Figure1.2CuBinducedapoptosisofosteosarcomacellsA、B：Hoechst染色測(cè)定骨肉瘤細(xì)胞凋亡；C、D：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞凋亡及凋亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

19圖1.2CuB誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡Figure1.2CuBinducedapoptosisofosteosarcomacellsA、B：Hoechst染色測(cè)定骨肉瘤細(xì)胞凋亡；C、D：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞凋亡及凋亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果。*P＜0.05vs0nmo....

圖1.3凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況

圖1.3凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況Figure1.3Theexpressionlevelsofapoptosis-relatedproteins2.4CuB誘導(dǎo)骨肉瘤143B和MG63細(xì)胞周期阻滯于G2/M期應(yīng)用FCM法檢測(cè)CuB對(duì)OS細(xì)胞周....

圖1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞周期分布情況

圖1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞周期分布情況Figure1.4CellcycledistributionwascalculatedbyflowcytometryA、B：FCM檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞周期分布及統(tǒng)計(jì)結(jié)果；C：WesternBlot檢測(cè)G2/M期周....

本文編號(hào)：3971162