目的:評(píng)價(jià)絲膠支架搭載mi R29-EVs處理過的原代成肌細(xì)胞治療嚴(yán)重骨骼肌損傷的修復(fù)效果。方法:我們提取并鑒定了原代成肌細(xì)胞。制備了絲膠支架,研究了其對(duì)原代成肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的作用。提取和鑒定了mi R29-EVs,并體外驗(yàn)證了mi R29-EVs對(duì)原代成肌細(xì)胞的作用。注射CTX造成C57/BL6小鼠脛骨前肌嚴(yán)重?fù)p傷,損傷早期(損傷后2周和4周)從組織學(xué)和功能學(xué)方面評(píng)估絲膠支架搭載mi R29-EVs處理過的原代成肌細(xì)胞治療嚴(yán)重骨骼肌損傷模型的效果。結(jié)果:我們提取的原代成肌細(xì)胞的純度達(dá)到了85%,在體外可以相互融合形成肌管,滿足肌肉修復(fù)的需求。絲膠支架的孔隙率為93%,平均孔徑為173μm。絲膠支架可以支持原代成肌細(xì)胞的粘附生長。絲膠支架移植到體內(nèi)6周基本降解完畢,絲膠支架降解液在體外下調(diào)成纖維細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白Col1a1和Vimentin的水平。EVs作為核酸載體,具有優(yōu)良生物相容性、高遞送效率和保護(hù)mi R29免受降解的作用。體外實(shí)驗(yàn)證明,在有或無TGF-β1刺激下,mi R29-EVs都能促進(jìn)成肌細(xì)胞分化形成肌管。mi R29-EVs可以上調(diào)成肌細(xì)胞的成肌分化基因Myo D...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1骨骼肌損傷后TGF-β1和miR-29含量變化

華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文1B）以及活化蛋白（圖1C）的表達(dá)水平逐漸升高，并且都呈現(xiàn)出損傷后第5天達(dá)到高峰，然后逐漸下降的動(dòng)態(tài)變化過程。文獻(xiàn)報(bào)道，在成肌細(xì)胞中，miR-29表達(dá)上調(diào)，可以對(duì)抗TGF-β1的抑制成肌細(xì)胞分化形成肌管以及促進(jìn)成肌細(xì)胞向肌....

圖2原代成肌細(xì)胞的提取和鑒定

華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論4.2原代成肌細(xì)胞的提取、鑒定我們從1-3日齡C57/BL6乳鼠中提取了原代成肌細(xì)胞[26]，通疫熒光染色對(duì)其進(jìn)行鑒定，desmin是一種中間絲蛋白，僅在成肌細(xì)胞達(dá)[27]，結(jié)果顯示，原代成肌細(xì)胞的提取純度可達(dá)到85%（圖....

圖3絲膠支架的合成和表征

華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文4.3絲膠支架的合成和表征通過溴化鋰裂解法從絲素蛋白缺陷型家蠶突變體（Bombyxmori，140Nd-s）產(chǎn)生的蠶繭中提取了絲膠蛋白[28]，與交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)形成絲膠水凝膠，真空凍干后形成絲膠支架（圖3A），移植到小鼠體內(nèi)....

圖5miR29-EVs的提取、鑒定

中提取miR29-EVs[31]。我們接著對(duì)miR29-EVs進(jìn)行了以下鑒定。TEM結(jié)果顯示miR29-EVs具有囊泡的雙層膜結(jié)構(gòu)（圖5B）；通過DLS檢測得到，miR29-EVs平均粒徑為158nm，最高峰值為188nm（圖5C）；WB結(jié)果顯示miR....

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