本文關(guān)鍵詞：酸環(huán)境對人髓核間充質(zhì)干細胞生物學活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察酸環(huán)境對體外培養(yǎng)的成人髓核間充質(zhì)干細胞(NPMSCs)生物學特征的影響,探討椎間盤退變的可能機制。方法:用膠原酶消化法從6例脊柱側(cè)凸矯形患者手術(shù)摘除的6個腰椎間盤(Pfirrmann椎間盤退變分級為Ⅰ級或Ⅱ級)髓核組織中分離細胞,體外培養(yǎng),傳代并觀察細胞形態(tài)。取P2代細胞,利用流式細胞儀對分離得到的細胞表型CD34、CD45、CD73、CD90、CD105和人類白細胞抗原(HLA)-DR表達情況進行檢測;用成骨、成軟骨、成脂培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)細胞,2周后分別用茜素紅、甲苯胺藍、油紅O對細胞進行染色,觀察其成脂、成骨、成軟骨能力。按照國際干細胞治療協(xié)會(ISCT)有關(guān)間充質(zhì)干細胞(MSCs)的判定標準,對分離得到的細胞進行綜合評估鑒定。在37℃、21%O2、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中用不同p H值(6.2、6.5、6.8、7.1、7.4)的DMEM10%血清培養(yǎng)液培養(yǎng)P2代細胞,1、3、5、7、9、11、13d后利用細胞增殖試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)檢測細胞增殖活力(OD值),培養(yǎng)3d時借助流式細胞儀檢測細胞凋亡率,不同p H值培養(yǎng)基培養(yǎng)28d時采用實時熒光定量(RT-PCR)檢測P2代細胞"干性維持"基因Oct4、Nanog、Jag1、Notch1及酸離子通道家族蛋白基因ASIC1、ASIC2、ASIC3、ASIC4的m RNA表達情況。結(jié)果:P0代細胞均貼壁生長。P2代細胞免疫表型鑒定顯示MSCs表面分子標記CD90、CD105、CD73表達比例分別高達96%、95%、94%以上,低表達CD45、CD34、HLA-DR(均低于4%)。茜素紅染色、油紅O染色及甲苯胺藍染色分別證實分離的細胞均可向骨、脂肪及軟骨細胞三系誘導分化。按照ISCT有關(guān)MSCs的判定標準,分離得到的細胞即NPMSCs。細胞代謝活性測定示P2代細胞在培養(yǎng)后1、3d各組間細胞OD值差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);5d、7d、9d、11d、13d各組間細胞OD值差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且p H值越低細胞的OD值越小。p H值7.4組的細胞凋亡率均小于其余各組,各組間有統(tǒng)計學差異(P0.05)。p H值7.4組"干性維持"基因Oct4、Nanog、Jag1、Notch1及酸離子通道家族蛋白基因ASIC1、ASIC2、ASIC3、ASIC4的m RNA均明顯高于p H值7.1、6.8、6.5、6.2組(P0.05)。隨著培養(yǎng)液p H值降低,細胞的凋亡率升高,細胞干性維持基因及酸通道家族蛋白基因的m RNA表達降低。結(jié)論:低p H值的酸環(huán)境培養(yǎng)1、3d對成人NPMSCs增殖無明顯影響,培養(yǎng)5d后明顯抑制NPMSCs的增殖和基因表達,促進細胞凋亡,且隨著p H降低作用越明顯。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院脊柱外科;
【關(guān)鍵詞】： 椎間盤退變 髓核間充質(zhì)干細胞 酸環(huán)境 生物學活性
【基金】：國家自然科學基金面上項目(編號:81472088)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： Hefei,230022,China椎間盤退變性疾病是臨床常見病,隨著社會老齡化,其發(fā)病率及相關(guān)治療費用也將不斷增加,給社會及經(jīng)濟帶來了沉重負擔,因此對椎間盤退變性疾病的治療意義重大[1]。目前臨床治療以對癥治療為主,而非對因治療。近年來人們試圖尋求細胞生物學方法治療椎間盤退變[2

【共引文獻】

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本文編號：395423