目的隨著細(xì)胞生物學(xué)和組織工程學(xué)的不斷發(fā)展,為治療骨缺損[1-2]開辟了新的領(lǐng)域。即在骨缺損處放置膜作為機(jī)械屏障,可將周圍結(jié)締組織阻擋于缺損處,產(chǎn)生特殊的再生空間,使骨生成細(xì)胞優(yōu)先生長,產(chǎn)生新骨而達(dá)到促進(jìn)骨性愈合的目的,誘導(dǎo)膜技術(shù)也是基于這一原理。選擇理想的膜與膜下材料聯(lián)合應(yīng)用修復(fù)骨缺損是關(guān)鍵。本項(xiàng)目擬構(gòu)建生物學(xué)活性與人體骨膜相似的組織工程骨膜,即骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)[3]和取健康足月孕婦羊膜制備人脫細(xì)胞羊膜(HAAM)[4]復(fù)合而成,體外觀察組織工程骨膜的生物活性,并檢測其相容性,為體內(nèi)修復(fù)大段骨缺損奠定基礎(chǔ)。由于大節(jié)段負(fù)重骨缺損的修復(fù)尤為困難[5],動物試驗(yàn)中組織工程骨膜技術(shù)有望成為臨床治療骨缺損良方。構(gòu)建的組織工程骨膜,其相關(guān)研究為骨組織工程和治療的發(fā)展提供了新的機(jī)會,逐漸成為一個熱點(diǎn),為骨缺損部位制造偽骨膜提供了可能性。方法人脫細(xì)胞羊膜與家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨膜的體外實(shí)驗(yàn)研究。通過HE染色、掃描電鏡(SEM)下觀察人脫細(xì)胞羊膜的結(jié)構(gòu),MTT描繪出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人脫細(xì)胞羊膜上的生長情況,鈣結(jié)節(jié)染色檢測(茜素紅染色、Von kossa染色)、ALP(堿性磷酸...

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１原代細(xì)胞

第１？２代細(xì)胞間的貼壁和生長速度無明顯區(qū)別，呈比原代更均勻的長梭形，細(xì)??胞間隔更均勻，傳至第３代時(shí)無明顯變化。其中傳代１－２天為潛伏生長期，３－６??天為對數(shù)生殖期，對數(shù)增殖期結(jié)束后進(jìn)入平臺期和下降期。如圖１．２．?３所示為家??兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)圖片。??圖１原代細(xì)胞?....

圖４骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨的鑒定??

誘導(dǎo)至２周左右倒置相差顯微鏡下可見集落生長的細(xì)胞群體，呈漩渦團(tuán)狀向??四周放射生長，形成多個分布不均、大小不一、形態(tài)各異的鈣素結(jié)節(jié)，逐漸增大，??３周后被茜素紅染成玫瑰紅色。如圖４所示成骨細(xì)胞檢測的結(jié)果。??ｕ?４ｋ．?？ｍ＂＇＇?＊?ｙ?ｘ?７＇ｍ??６?二二’?務(wù)．??ｉＴ?....

圖５人脫細(xì)胞羊膜??．

．經(jīng)物理及化學(xué)等方法處理獲得的人脫細(xì)顯示大量的粉紅色膠原細(xì)胞外基質(zhì)，呈網(wǎng)狀未見有細(xì)胞形態(tài)的結(jié)構(gòu)。如圖６．?７所示。??

圖７電鏡下觀察??

?圖７電鏡下觀察??兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜（實(shí)驗(yàn)增殖情況，接種后第２天細(xì)胞開始增殖，第３驗(yàn)組及對照組細(xì)胞增殖速度無顯著性差異（ｐ增殖的高峰，實(shí)驗(yàn)組第７天細(xì)胞達(dá)增殖高峰，３天，５天實(shí)驗(yàn)組與對照組增殖細(xì)胞量的組間，對照組增殖細(xì)胞量比實(shí)驗(yàn)組少；....

本文編號：3923596