目的:術(shù)后認(rèn)知功能障礙(Postoperation cognitive dysfunction,POCD)是一種常發(fā)生于老年患者術(shù)后的并發(fā)癥,指患者在手術(shù)及麻醉后出現(xiàn)的認(rèn)知功能下降。盡管POCD的病理生理學(xué)機(jī)制尚且不明確,但越來(lái)越多的研究認(rèn)為年齡已經(jīng)成為POCD重要且獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。POCD的發(fā)病機(jī)制目前并不清楚,但近年來(lái)越來(lái)越多的研究證實(shí)POCD與神經(jīng)炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的重要組成部分,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫防線(xiàn)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化是異質(zhì)性的,根據(jù)激活的表型,激活的小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮雙重作用,小膠質(zhì)細(xì)胞可以產(chǎn)生細(xì)胞毒性(M1表型)或神經(jīng)保護(hù)作用(M2表型)。小膠質(zhì)細(xì)胞可以通過(guò)LPS或者干擾素γ誘發(fā)M1表型,表達(dá)炎性細(xì)胞因子產(chǎn)物。M2表型可釋放抗炎細(xì)胞因子,增強(qiáng)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)的產(chǎn)生。小膠質(zhì)細(xì)胞的活化需要嚴(yán)格調(diào)控,以限制細(xì)胞因子的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)。C-X3-C motif趨化因子配體1(CX3CL1)在神經(jīng)元上表達(dá),被認(rèn)為是通過(guò)與其受體的相互作用來(lái)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞功能。CX3CL1通過(guò)降低神經(jīng)毒性,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化,促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)可溶性因子(如...

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:小膠質(zhì)細(xì)胞M2型極化在老年鼠術(shù)后認(rèn)知功能及海馬區(qū)炎性因子表達(dá)的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象和方法
            2.2.1 研究對(duì)象
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞干預(yù)
            2.2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.5 動(dòng)物手術(shù)模型建立
            2.2.6 小腦延髓池注射
            2.2.7 樣品采集與制備
            2.2.8 動(dòng)物行為學(xué)的檢測(cè)
            2.2.9 Western Blot印跡檢測(cè)海馬區(qū)相關(guān)炎性因子和BDNF的表達(dá)
            2.2.10 Real-time PCR檢測(cè)Arg1 mRNA的表達(dá)水平
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        3.2 水迷宮實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證應(yīng)用抗炎細(xì)胞因子IL-4改善成年鼠和老年鼠的術(shù)后認(rèn)知能力
        3.3 年齡加劇手術(shù)后海馬區(qū)神經(jīng)炎癥反應(yīng),應(yīng)用IL-4 能抑制神經(jīng)炎癥進(jìn)程
        3.4 年齡和手術(shù)創(chuàng)傷抑制了IL-4 的水平和其相應(yīng)的受體IL-4R的表達(dá)
        3.5 老齡增強(qiáng)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,IL-4 的治療降低了Iba-1 的水平
            3.5.1 檢測(cè)大鼠術(shù)后海馬區(qū)Iba-1 表達(dá)水平
            3.5.2 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)鼠海馬區(qū)Arg1 mRNA表達(dá)水平
        3.6 年齡加重大鼠手術(shù)創(chuàng)傷引起的海馬區(qū)BDNF表達(dá)降低
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:CX3CL1-CX3CR1 信號(hào)通路參與小膠質(zhì)細(xì)胞M2 極化對(duì)老年鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象和方法
            2.2.1 研究對(duì)象
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞干預(yù)
            2.2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.5 動(dòng)物手術(shù)模型建立
            2.2.6 側(cè)腦室注射
            2.2.7 樣品采集與制備
            2.2.8 動(dòng)物行為學(xué)的檢測(cè)
            2.2.9 Western Blot印跡檢測(cè)海馬區(qū)CX3CL1 及其受體CX3CR1、炎性因子和BDNF的表達(dá)
            2.2.10 免疫組化法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba-1 的表達(dá)
            2.2.11 Real-time PCR檢測(cè)Arg1 的表達(dá)水平
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 外源性給予CX3CL1對(duì)LPS處理的HAPI細(xì)胞的影響
        3.2 外源性給予CX3CL1 可以改善手術(shù)創(chuàng)傷引起的認(rèn)知功能障礙
        3.3 手術(shù)創(chuàng)傷和年齡降低了海馬CX3CL1及CX3CR1 的表達(dá)
        3.4 年齡加重手術(shù)誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng),外源性注射CX3CL1 降低促炎細(xì)胞因子IL-1β的表達(dá)
        3.5 手術(shù)創(chuàng)傷增強(qiáng)了小膠質(zhì)細(xì)胞活化,外源注射CX3CL1 抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化
            3.5.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)大鼠術(shù)后海馬區(qū)Iba-1 表達(dá)水平
            3.5.2 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠術(shù)后海馬區(qū)M2 型小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Arg1mRNA表達(dá)水平
        3.5 手術(shù)創(chuàng)傷降低BDNF水平,外源性CX3CL1 逆轉(zhuǎn)BDNF表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:microRNA-29b-3p通過(guò)調(diào)控神經(jīng)元CX3CL1 mRNA對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞M2極化的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 引物序列
            2.1.3 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象和方法
            2.2.1 高通量測(cè)序
            2.2.2 研究對(duì)象
            2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.4 生物信息學(xué)分析及預(yù)測(cè)miRNA靶基因
            2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.6 Real-time PCR檢測(cè)miR-29b-3p、CX3CL1 的表達(dá)水平
            2.2.7 動(dòng)物手術(shù)模型建立
            2.2.8 側(cè)腦室注射
            2.2.9 樣品采集與制備
            2.2.10 動(dòng)物行為學(xué)的檢測(cè)
            2.2.11 Western Blot印跡檢測(cè)海馬區(qū)IL-1β、CX3CL1 的表達(dá)
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 手術(shù)創(chuàng)傷后低表達(dá)的與CX3CL1 有關(guān)的miRNA
        3.2 miR-29b-3p在老年鼠及行肝部分切除術(shù)老年鼠術(shù)后的表達(dá)
        3.3 miR-29b-3p與靶基因CX3CL1 結(jié)合位點(diǎn)
        3.4 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miRNA轉(zhuǎn)染后HT22 細(xì)胞中miR-29b-3p及 CX3CL1mRNA表達(dá)水平
        3.5 抑制miR-29b-3p可以改善手術(shù)創(chuàng)傷引起的認(rèn)知功能障礙
        3.6 過(guò)表達(dá)miR-29b-3p可降低海馬區(qū)CX3CL1 的表達(dá),抑制miR-29b-3p可增強(qiáng)CX3CL1 的表達(dá)
        3.7 過(guò)表達(dá)miR-29b-3p可增加海馬區(qū)炎性因子的表達(dá),抑制miR-29b-3p可減弱IL-1β的表達(dá)水平
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3919125