目的:術后認知功能障礙(Postoperation cognitive dysfunction,POCD)是一種常發(fā)生于老年患者術后的并發(fā)癥,指患者在手術及麻醉后出現(xiàn)的認知功能下降。盡管POCD的病理生理學機制尚且不明確,但越來越多的研究認為年齡已經(jīng)成為POCD重要且獨立的危險因素。POCD的發(fā)病機制目前并不清楚,但近年來越來越多的研究證實POCD與神經(jīng)炎癥反應密切相關。小膠質(zhì)細胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的重要組成部分,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫防線。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的小膠質(zhì)細胞活化是異質(zhì)性的,根據(jù)激活的表型,激活的小膠質(zhì)細胞發(fā)揮雙重作用,小膠質(zhì)細胞可以產(chǎn)生細胞毒性(M1表型)或神經(jīng)保護作用(M2表型)。小膠質(zhì)細胞可以通過LPS或者干擾素γ誘發(fā)M1表型,表達炎性細胞因子產(chǎn)物。M2表型可釋放抗炎細胞因子,增強神經(jīng)營養(yǎng)介質(zhì)的產(chǎn)生。小膠質(zhì)細胞的活化需要嚴格調(diào)控,以限制細胞因子的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)炎癥反應。C-X3-C motif趨化因子配體1(CX3CL1)在神經(jīng)元上表達,被認為是通過與其受體的相互作用來調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞功能。CX3CL1通過降低神經(jīng)毒性,抑制小膠質(zhì)細胞活化,促進神經(jīng)保護可溶性因子(如...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:小膠質(zhì)細胞M2型極化在老年鼠術后認知功能及海馬區(qū)炎性因子表達的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 細胞干預
            2.2.4 動物實驗分組
            2.2.5 動物手術模型建立
            2.2.6 小腦延髓池注射
            2.2.7 樣品采集與制備
            2.2.8 動物行為學的檢測
            2.2.9 Western Blot印跡檢測海馬區(qū)相關炎性因子和BDNF的表達
            2.2.10 Real-time PCR檢測Arg1 mRNA的表達水平
        2.3 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1 小膠質(zhì)細胞形態(tài)學變化
        3.2 水迷宮實驗驗證應用抗炎細胞因子IL-4改善成年鼠和老年鼠的術后認知能力
        3.3 年齡加劇手術后海馬區(qū)神經(jīng)炎癥反應,應用IL-4 能抑制神經(jīng)炎癥進程
        3.4 年齡和手術創(chuàng)傷抑制了IL-4 的水平和其相應的受體IL-4R的表達
        3.5 老齡增強小膠質(zhì)細胞的激活,IL-4 的治療降低了Iba-1 的水平
            3.5.1 檢測大鼠術后海馬區(qū)Iba-1 表達水平
            3.5.2 Real-time PCR實驗檢測實驗鼠海馬區(qū)Arg1 mRNA表達水平
        3.6 年齡加重大鼠手術創(chuàng)傷引起的海馬區(qū)BDNF表達降低
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:CX3CL1-CX3CR1 信號通路參與小膠質(zhì)細胞M2 極化對老年鼠術后認知功能障礙的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 細胞干預
            2.2.4 動物實驗分組
            2.2.5 動物手術模型建立
            2.2.6 側(cè)腦室注射
            2.2.7 樣品采集與制備
            2.2.8 動物行為學的檢測
            2.2.9 Western Blot印跡檢測海馬區(qū)CX3CL1 及其受體CX3CR1、炎性因子和BDNF的表達
            2.2.10 免疫組化法檢測大鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細胞標記物Iba-1 的表達
            2.2.11 Real-time PCR檢測Arg1 的表達水平
        2.3 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1 外源性給予CX3CL1對LPS處理的HAPI細胞的影響
        3.2 外源性給予CX3CL1 可以改善手術創(chuàng)傷引起的認知功能障礙
        3.3 手術創(chuàng)傷和年齡降低了海馬CX3CL1及CX3CR1 的表達
        3.4 年齡加重手術誘導的神經(jīng)炎癥反應,外源性注射CX3CL1 降低促炎細胞因子IL-1β的表達
        3.5 手術創(chuàng)傷增強了小膠質(zhì)細胞活化,外源注射CX3CL1 抑制小膠質(zhì)細胞活化
            3.5.1 免疫組織化學檢測大鼠術后海馬區(qū)Iba-1 表達水平
            3.5.2 Real-time PCR實驗檢測大鼠術后海馬區(qū)M2 型小膠質(zhì)細胞標記物Arg1mRNA表達水平
        3.5 手術創(chuàng)傷降低BDNF水平,外源性CX3CL1 逆轉(zhuǎn)BDNF表達
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:microRNA-29b-3p通過調(diào)控神經(jīng)元CX3CL1 mRNA對小膠質(zhì)細胞M2極化的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 引物序列
            2.1.3 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 高通量測序
            2.2.2 研究對象
            2.2.3 實驗分組
            2.2.4 生物信息學分析及預測miRNA靶基因
            2.2.5 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.6 Real-time PCR檢測miR-29b-3p、CX3CL1 的表達水平
            2.2.7 動物手術模型建立
            2.2.8 側(cè)腦室注射
            2.2.9 樣品采集與制備
            2.2.10 動物行為學的檢測
            2.2.11 Western Blot印跡檢測海馬區(qū)IL-1β、CX3CL1 的表達
        2.3 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1 手術創(chuàng)傷后低表達的與CX3CL1 有關的miRNA
        3.2 miR-29b-3p在老年鼠及行肝部分切除術老年鼠術后的表達
        3.3 miR-29b-3p與靶基因CX3CL1 結(jié)合位點
        3.4 Real-time PCR實驗檢測miRNA轉(zhuǎn)染后HT22 細胞中miR-29b-3p及 CX3CL1mRNA表達水平
        3.5 抑制miR-29b-3p可以改善手術創(chuàng)傷引起的認知功能障礙
        3.6 過表達miR-29b-3p可降低海馬區(qū)CX3CL1 的表達,抑制miR-29b-3p可增強CX3CL1 的表達
        3.7 過表達miR-29b-3p可增加海馬區(qū)炎性因子的表達,抑制miR-29b-3p可減弱IL-1β的表達水平
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3919125