目的研究lncRNA DANCR在骨關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)水平變化,探究其可能參與骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制。方法取膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者的內(nèi)側(cè)髁關(guān)節(jié)軟骨作為實(shí)驗(yàn)組,取股骨頸骨折患者的股骨頭軟骨作為對照組,體外qRT-PCR檢測DANCR在骨關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)水平變化;通過Anenexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測、流式細(xì)胞分析技術(shù)確定DANCR是否可抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡;通過基因芯片、starBase v2.0生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測DANCR的目標(biāo)miRNA,進(jìn)行雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)、RIP實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR驗(yàn)證;通過TargetScan等生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測目標(biāo)miRNA的靶基因,進(jìn)行雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)、qRT-PCR、Western Blot驗(yàn)證miRNA是否調(diào)控靶基因的表達(dá);通過相關(guān)性分析、qRT-PCR、Western Blot驗(yàn)證DANCR能否調(diào)控靶基因的表達(dá),并且驗(yàn)證目標(biāo)miRNA能否阻斷這種調(diào)控作用。結(jié)果(1)qRT-PCR顯示DANCR表達(dá)水平在人OA軟骨細(xì)胞中較正常軟骨細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);(2)Anenexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測、流式細(xì)胞分析顯示DAN...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1qRT-PCR顯示DANCR在OA中表達(dá)增高

圖1qRT-PCR顯示DANCR在OA中表達(dá)增高:通過qRT-PCR檢測正常軟骨組織和OA軟骨組織標(biāo)本中DANCR的ANCR能夠抑制OA軟骨細(xì)胞凋亡進(jìn)一步揭示DANCR對OA軟骨細(xì)胞的影響，使用細(xì)胞轉(zhuǎn)DANCR在軟骨細(xì)胞中的表達(dá)（圖2....

圖2DANCR抑制劑增加OA軟骨細(xì)胞凋亡（A）:轉(zhuǎn)染DANCR抑制劑后的OA軟骨細(xì)胞中DANCR相對表達(dá)量；（B）：通過流式細(xì)胞

圖2DANCR抑制劑增加OA軟骨細(xì)胞凋亡（A）:轉(zhuǎn)染DANCR抑制劑后的OA軟骨細(xì)胞中DANCR相對表達(dá)量；（B）：技術(shù)檢測DANCR抑制劑對OA軟骨細(xì)胞凋亡的影響。3miR-216a-5p是DANCR的直接靶點(diǎn)lncRNA能夠在染色質(zhì)重組....

圖3OA軟骨細(xì)胞中DANCR直接結(jié)合miR-216a-5p（A）：starBasev2.0數(shù)據(jù)庫顯示miR-216a-5p與DANCR的結(jié)合位點(diǎn)；（B）：雙熒光素酶報告基因顯示miR-216a-5pmimics降低DANCR-WT的熒光素酶活性；（C）：RIP實(shí)驗(yàn)檢測DANCR和miR-216a-5p之間的相互作用；（D）：DANCR抑制劑增加miR-216a-5p的相對表

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論表達(dá)變化。qRT-PCR結(jié)果證實(shí)了我們的猜想，在OA軟骨細(xì)胞中miR-216a-5表達(dá)降低（圖3E）。那么DANCR的升高與miR-216a-5p的降低是一種什么關(guān)我們進(jìn)行了數(shù)據(jù)分析，得出一條近似的線性關(guān)系（圖3F）。以上這些結(jié)果共同明....

圖4DANCR通過miR-216a-5p調(diào)控OA軟骨細(xì)胞凋亡

量；（E）：OA軟骨細(xì)胞中miR-216a-5p的表達(dá)較正常細(xì)胞顯著降低；（F）：中DANCR與miR-216a-5p的表達(dá)成負(fù)相關(guān)關(guān)系，*p<0.05。DANCR通過miR-216a-5p調(diào)控OA軟骨細(xì)胞凋亡miR-216a-5p是DANCR的直....

本文編號：3916842