目的:研究14-3-3ε蛋白對氧糖剝奪/再灌注(oxygen-glucose deprivation reperfusion,OGDR)誘導(dǎo)的脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及其機制。方法:原代培養(yǎng)新生SD大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞建立OGDR模型,用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活力,乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性檢測試劑盒檢測LDH活性,用ELISA法檢測谷氨酸濃度、TNF-α和IL-1β的表達,Real-Time PCR和Western Blot分別檢測14-3-3εmRNA和蛋白表達,用Western Blot檢測核轉(zhuǎn)錄因子-B(Nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)、星形膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、膠質(zhì)瘢痕標(biāo)志物neurocan和phosphacan蛋白的表達;轉(zhuǎn)染14-3-3εsiRNA沉默14-3-3ε表達,將細(xì)胞分為對照組、OGDR組、非特異性轉(zhuǎn)染(Scramble)組和14-3-3εsiRNA組,檢測14-3-3εsi...

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定
        2.2 OGDR模型的建立
        2.3 siRNA轉(zhuǎn)染
            2.3.1 CCK-8
            2.3.2 LDH活性檢測
            2.3.3 ELISA法
        2.4 Real-Time PCR
        2.5 Western Blot
結(jié)果
    1細(xì)胞鑒定
    2 OGDR誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷
    3 OGDR誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化及膠質(zhì)瘢痕形成
    4 14-3-3ε在星形膠質(zhì)細(xì)胞OGDR后表達增加
    5 14-3-3εsiRNA轉(zhuǎn)染對14-3-3ε表達的影響
    6 14-3-3ε基因沉默對OGDR誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和膠質(zhì)瘢痕形成的影響
    7 14-3-3εsiRNA抑制NF-κB表達阻礙星形膠質(zhì)細(xì)胞活化
討論



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