目的:骨癌疼痛(bone cancer pain,BCP)由于其復(fù)雜的機(jī)制而難以治療,因而嚴(yán)重的影響了患者的日常生活質(zhì)量。最近的研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了許多與疼痛相關(guān)的通路。然而,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的相關(guān)因素及其與骨癌痛的關(guān)系尚不清楚。本研究目的旨在探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在骨癌痛中的作用及其機(jī)制。方法:采用成年雌性SD大鼠脛骨髓腔接種Walker 256乳腺癌細(xì)胞制備骨癌痛模型,疼痛行為學(xué)檢測采用大鼠左側(cè)后肢足底部纖毛機(jī)械刺激針方法(PWT)衡量骨癌痛閾值。通過蛋白質(zhì)免疫印跡檢測技術(shù),定量檢測免疫球蛋白結(jié)合蛋白/葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(BIP/GRP78)、活化轉(zhuǎn)錄因子-6(ATF6)、磷酸化肌醇需求酶-1(p-IRE1)、磷酸化蛋白激酶RNA樣ER激酶(p-PERK)等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物以及凋亡標(biāo)記蛋白cleaved caspase-3的表達(dá)水平。運用免疫熒光技術(shù)檢測脊髓腰膨大組織的切片中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)記蛋白(p-e IF2α)和cleaved caspase-3的細(xì)胞定位。Tunel染色用于驗證脊髓背角組織中神經(jīng)元的凋亡發(fā)生。結(jié)果:骨癌痛模型大鼠發(fā)生持續(xù)性機(jī)械性疼痛,并且脊髓背角組織中GRP78、A...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1所示：BCP大鼠左側(cè)脛骨接種腫瘤后發(fā)生的行為學(xué)和組織化學(xué)分析

瘤細(xì)胞浸潤。總的來說，組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，髓內(nèi)接種9d后腫瘤細(xì)胞明顯侵犯正常骨結(jié)構(gòu)，與此相反，術(shù)后第9天接種熱殺死Walker256乳腺癌細(xì)胞的大鼠脛骨則未見明顯的骨質(zhì)損傷（圖1B）。

圖2所示：骨癌痛大鼠造模后第9天，脊髓組織Tunel染色結(jié)果，熒光顯微鏡下組織切片上凋亡的細(xì)胞呈紅色熒光，細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，標(biāo)尺100um，箭頭指處：Tunel與DAPI共表達(dá)

23相比；單因素方差分析和Bonferroni檢驗；n=10)。(B)腫瘤細(xì)胞接種后第9天，左側(cè)脛骨標(biāo)本經(jīng)蘇木精染色、伊紅染色，病理切片藍(lán)色箭頭顯示大量細(xì)胞浸潤髓腔。2.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物和cleaved-caspase-3在骨癌痛大鼠的脊髓背角組織中持續(xù)表達(dá)上調(diào)。一方面，在本研究....

圖3所示：Westernblot分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記蛋白(GRP78、ATF6、p-IRE1、p-PERK)表達(dá)變化及caspase-3a在脊髓背角組織隨時間變化的水平

24圖3所示：Westernblot分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記蛋白(GRP78、ATF6、p-IRE1、p-PERK)表達(dá)變化及caspase-3a在脊髓背角組織隨時間變化的水平。BCP大鼠脊髓中ER應(yīng)激標(biāo)志物和caspase-3a表達(dá)增強(qiáng)。與Sham組相比，BCP組脊髓背角組織中的GR....

圖4所示：免疫熒光顯示caspase-3a定位于脊髓背角組織

25組大鼠和骨癌痛組大鼠的脊髓腰膨大組織的切片，并且進(jìn)行觀察了caspase-3a與神經(jīng)元的特異性標(biāo)記蛋白(NeuN)，星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記蛋白(GFAP)，和小膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記蛋白(IBA-1)熒光共定位情況。如圖4所示，caspase-3a，作為凋亡的標(biāo)志蛋白，主要定....

本文編號：3907171