背景和目的骨性關(guān)節(jié)炎是全球最常見的慢性退行性關(guān)節(jié)疾病,可以導致疼痛及殘疾,嚴重影響患者生活質(zhì)量。軟骨、軟骨下骨、滑膜和全身炎癥在骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。誘導型一氧化氮合酶(iNOS)及其合成的一氧化氮(NO)在骨性關(guān)節(jié)炎中通過促炎、促進軟骨細胞凋亡和細胞外基質(zhì)降解、抑制細胞外基質(zhì)合成、加重滑膜炎從而發(fā)揮重要的作用。右美托咪定(Dex)是高選擇性的α₂腎上腺素受體激動劑,在許多研究中發(fā)現(xiàn)有抗炎、抑制交感、器官保護、鎮(zhèn)痛等作用。右美托咪定是否通過調(diào)節(jié)軟骨細胞iNOS/NO的產(chǎn)生而在骨性關(guān)節(jié)炎中發(fā)揮作用有待充分闡明。在本研究中,我們研究了不同濃度右美托咪定(0.1μM、1μM、10μM)對骨性關(guān)節(jié)炎細胞模型中iNOS活性以及NO產(chǎn)量的影響。方法用重組大鼠IL-1β(10 ng/mL)刺激大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細胞建立骨性關(guān)節(jié)炎細胞模型。用不同濃度右美托咪定(0.1、1、10μM)和等體積的生理鹽水分別處理IL-1β誘導的軟骨細胞。實驗分為5組:(1)對照組(control),(2)IL-1β刺激組(M),(3)IL-1β刺激+低濃度(0.1μM)的右美托咪定(Dex...

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【學位級別】：碩士

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圖2：軟骨細胞經(jīng)阿利新藍（PH2.5）染色后圖片

263.2軟骨細胞經(jīng)阿利新藍（PH2.5）染色后觀察為鑒定所培育的細胞的表型，我們采用阿利新藍對細胞進行染色，阿利新藍是一種類銅酞花青共軛染料,呈中度堿性且?guī)в嘘栯x子，與酸性或陰離子底物（如羧基或硫酸根）結(jié)合,形成不溶性的復合物，呈現(xiàn)出藍色。此外，pH值也可以影響染色性能，例如，....

圖3：三種濃度的右美托咪定且孵育不同時間對軟骨細胞增殖的影響

27種濃度的右美托咪定對軟骨細胞無細胞毒性，可以安全用于后續(xù)實驗。圖3：三種濃度的右美托咪定且孵育不同時間對軟骨細胞增殖的影響。培養(yǎng)的P2代軟骨細胞使用不同濃度的右美托咪定（0.1、1、10μM）分別處理24小時、48小時、72小時，用CCK8檢測細胞活性。NS:生理鹽水組；DL....

圖4：不同濃度右美托咪定對IL-1β刺激軟骨細胞NO的影響

28的吸光度測定了硝酸鹽的量，因為這部分不僅包含了NO直接產(chǎn)生的硝酸鹽，而且也包括了由亞硝酸鹽轉(zhuǎn)變而來的那部分硝酸鹽。因此，此法才能更加準確地反應(yīng)所檢測的NO釋放水平。我們的結(jié)果顯示IL-1β刺激軟骨細胞，軟骨細胞NO的釋放明顯增加，我們使用了不同濃度的右美托咪定與IL-1β共培....

圖5：不同濃度右美托咪定對IL-1β刺激軟骨細胞iNOS活性的影響

29定試劑盒。測定原理：iNOS催化L-精氨酸和分子氧，可以生成NO，與結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶（eNOS和nNOS）合成NO不同，此反應(yīng)不依賴于鈣，NO可以進一步與親核性物質(zhì)合成有色化合物，該化合物可以在530nm波長處，測定其吸光度。根據(jù)吸光度的大小計算出iNOS的活性。我們的結(jié)果....

本文編號：3903493