目的:(1)表皮干細胞(epidermal stem cells,ESCs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。(2)探索通過過表達細胞周期蛋白D1(CCND1)誘導(dǎo)成熟表皮細胞去分化為表皮干細胞,觀察去分化后細胞的形態(tài)、表型、增殖情況的改變。(3)探索過表達CCND1誘導(dǎo)后的表皮細胞對裸鼠皮膚創(chuàng)面修復(fù)的促進作用。方法:(1)取包皮過長病人術(shù)后的新鮮成人包皮組織,去除皮下的軟組織。分別經(jīng)分解酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶消化,200目濾網(wǎng)過濾。用Epilife完全培養(yǎng)基將分離的細胞重懸,接種于Ⅳ型膠原包被的培養(yǎng)瓶中。30min后換液,PBS沖洗掉尚未貼壁的表皮細胞,重新加入Epilife培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。免疫細胞熒光技術(shù)檢測該細胞的表皮干細胞抗體CK19、β1和成熟表皮細胞抗體CK10的表達情況。(2)將質(zhì)粒PEGFP-N1和細胞周期蛋白D1(CCND1)基因合成表達質(zhì)粒PEGFP-N1-CCND1,并通過Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染成熟表皮細胞,造成成熟表皮細胞CCND1基因過表達。設(shè)PEGFP-N1-CCND1轉(zhuǎn)染后的表皮細胞為實驗組,表皮干細胞為陽性對照組,空載體PEGFP-N...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1為表皮干細胞的生長狀態(tài)

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文一、表皮干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定錄下來。1.2結(jié)果1.2.1表皮干細胞的形態(tài)和生長狀態(tài)觀察剛貼壁的表皮干細胞呈團塊狀生長，3-4天后團塊開始融合連成一片。表皮干細胞胞體較小，胞核大，呈橢圓形，顏色略深。表皮干細胞生長迅速，25cm2培養(yǎng)瓶5-7....

圖1.2免疫細胞熒光技術(shù)檢測表皮干細胞和成熟表皮細胞的抗體β1、CK19和ck10的表達情況（標尺為1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568標記一抗）

圖1.2免疫細胞熒光技術(shù)檢測表皮干細胞和成熟表皮細胞的抗體β1、CK19和ck10的表達情況（標尺為1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568標記一抗）。A為表皮干細胞的β1免疫熒光；B為表皮干細胞的CK19的免疫熒光；C為ck10的....

圖2.1目的基因的的測序鑒定結(jié)果

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文二、過表達CCND1誘導(dǎo)成熟表皮細胞去分化為表皮干細胞查出的CCND1（基因號：BC014078）的序列一致。

圖2.2轉(zhuǎn)染后各組細胞的形態(tài)變化（標尺為1：100μm）

染細胞數(shù)量的4倍，但與表皮干細胞數(shù)量相當。表2.1培養(yǎng)5d后各組細胞的數(shù)量分組細胞的數(shù)量（×105）實驗組陽性對照組陰性對照組24±2**6±125±2****p<0.01vs陰性對照組2.2.3細胞周期蛋白D1誘導(dǎo)去分化后表皮細胞形態(tài)變化表皮干細胞離體培....

本文編號：3899066