目的:探究采用軟骨細胞外基質(zhì)源性微粒(Cartilage ECM derived particles,CEDPs)及PCL支架作為載體,復合自體脂肪組織來源的血管基質(zhì)成分(Stromal Vascular Fraction,SVF)構建組織工程軟骨修復山羊膝關節(jié)負重區(qū)軟骨大面積缺損的可行性。方法:使用3-D打印技術制備多孔的聚己內(nèi)酯(PCL)支架。無菌環(huán)境下刮取山羊膝關節(jié)處軟骨碎片,通過粉碎、逐步脫細胞等技術,制備山羊軟骨來源的細胞外基質(zhì)源性微粒。在體外對支架和軟骨細胞外基質(zhì)源性微粒進行微觀形態(tài)學檢測,并復合細胞,觀察材料對細胞生長及分化的影響。無菌條件下取山羊頸背部皮下脂肪,利用酶消法獲得自體脂肪來源SVF。體外驗證其具有多項分化能力。手術時,在山羊右膝關節(jié)內(nèi)外側股骨髁負重區(qū)分別建立一個直徑8mm的全層軟骨缺損。實驗分為5組,每組4只山羊(8個缺損區(qū)),分別為A組:空白對照組;B組:CEDPs組;C組:CEDPs+SVF組(微組織組);D組:PCL組;E組:PCL+微組織組。A、B、C組在術后3個月和6個月各取2只,D、E兩組在術后6個月進行取材。分別使用國際軟骨修復協(xié)會大體評分標準...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 利用細胞外基質(zhì)源性微粒復合脂肪組織來源的血管基質(zhì)成分修復山羊膝關節(jié)大面積軟骨缺損
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和儀器
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器
        1.2 實驗動物
        1.3 實驗方法
            1.3.1 軟骨細胞外基質(zhì)源性微粒(CEDPs)的制備
            1.3.2 脫細胞后的CEDPs的特征觀察
            1.3.3 山羊自體脂肪SVF的獲取
            1.3.4 山羊自體脂肪SVF的三系誘導
            1.3.5 SVF與 CEDPs的共培養(yǎng)
            1.3.6 CEDPs復合SVF修復山羊膝關節(jié)負重區(qū)軟骨缺損
            1.3.7 標本MRI觀察分析
            1.3.8 標本大體觀察
            1.3.9 標本組織學分析
            1.3.10 新生組織糖胺聚糖含量測定
            1.3.11 新生組織生物力學檢測
            1.3.12 統(tǒng)計學方法
    2 結果
        2.1 脫細胞后的CEDPs的特征觀察
        2.2 山羊自體SVF的細胞培養(yǎng)及傳代
        2.3 SVF的成脂、成骨、成軟骨三系分化誘導
        2.4 SVF與 CEDPs共培養(yǎng)
        2.5 標本大體觀察
        2.6 標本MRI檢查
        2.7 組織學分析與評分
        2.8 糖胺聚糖含量測定結果
        2.9 生物力學分析與評分
    3 討論
    4 結論
第二部分 3D打印PCL支架復合SVF構建組織工程軟骨修復山羊膝關節(jié)大面積軟骨缺損
    1 材料和方法
        1.1 主要試劑和儀器
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器
        1.2 實驗動物
        1.3 實驗方法
            1.3.1 3D打印PCL支架的制備
            1.3.2 PCL支架的特性和細胞相容性檢測
            1.3.3 修復山羊膝關節(jié)負重區(qū)軟骨缺損
            1.3.4 標本MRI觀察分析
            1.3.5 標本大體觀察
            1.3.6 標本組織學分析
            1.3.7 標本生物力學分析
            1.3.8 統(tǒng)計學方法
    2 結果
        2.1 PCL支架的形態(tài)及細胞相容性
        2.2 標本大體觀察
        2.3 標本MRI觀察
        2.4 組織學分析與評分
        2.5 生物力學分析與評分
    3 討論
    4 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄一
附錄二
致謝
個人簡介



本文編號：3852278