目的:探究采用軟骨細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒(Cartilage ECM derived particles,CEDPs)及PCL支架作為載體,復(fù)合自體脂肪組織來(lái)源的血管基質(zhì)成分(Stromal Vascular Fraction,SVF)構(gòu)建組織工程軟骨修復(fù)山羊膝關(guān)節(jié)負(fù)重區(qū)軟骨大面積缺損的可行性。方法:使用3-D打印技術(shù)制備多孔的聚己內(nèi)酯(PCL)支架。無(wú)菌環(huán)境下刮取山羊膝關(guān)節(jié)處軟骨碎片,通過(guò)粉碎、逐步脫細(xì)胞等技術(shù),制備山羊軟骨來(lái)源的細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒。在體外對(duì)支架和軟骨細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒進(jìn)行微觀形態(tài)學(xué)檢測(cè),并復(fù)合細(xì)胞,觀察材料對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的影響。無(wú)菌條件下取山羊頸背部皮下脂肪,利用酶消法獲得自體脂肪來(lái)源SVF。體外驗(yàn)證其具有多項(xiàng)分化能力。手術(shù)時(shí),在山羊右膝關(guān)節(jié)內(nèi)外側(cè)股骨髁負(fù)重區(qū)分別建立一個(gè)直徑8mm的全層軟骨缺損。實(shí)驗(yàn)分為5組,每組4只山羊(8個(gè)缺損區(qū)),分別為A組:空白對(duì)照組;B組:CEDPs組;C組:CEDPs+SVF組(微組織組);D組:PCL組;E組:PCL+微組織組。A、B、C組在術(shù)后3個(gè)月和6個(gè)月各取2只,D、E兩組在術(shù)后6個(gè)月進(jìn)行取材。分別使用國(guó)際軟骨修復(fù)協(xié)會(huì)大體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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英文摘要
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前言
第一部分 利用細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒復(fù)合脂肪組織來(lái)源的血管基質(zhì)成分修復(fù)山羊膝關(guān)節(jié)大面積軟骨缺損
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和儀器
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 軟骨細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒(CEDPs)的制備
            1.3.2 脫細(xì)胞后的CEDPs的特征觀察
            1.3.3 山羊自體脂肪SVF的獲取
            1.3.4 山羊自體脂肪SVF的三系誘導(dǎo)
            1.3.5 SVF與 CEDPs的共培養(yǎng)
            1.3.6 CEDPs復(fù)合SVF修復(fù)山羊膝關(guān)節(jié)負(fù)重區(qū)軟骨缺損
            1.3.7 標(biāo)本MRI觀察分析
            1.3.8 標(biāo)本大體觀察
            1.3.9 標(biāo)本組織學(xué)分析
            1.3.10 新生組織糖胺聚糖含量測(cè)定
            1.3.11 新生組織生物力學(xué)檢測(cè)
            1.3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 脫細(xì)胞后的CEDPs的特征觀察
        2.2 山羊自體SVF的細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        2.3 SVF的成脂、成骨、成軟骨三系分化誘導(dǎo)
        2.4 SVF與 CEDPs共培養(yǎng)
        2.5 標(biāo)本大體觀察
        2.6 標(biāo)本MRI檢查
        2.7 組織學(xué)分析與評(píng)分
        2.8 糖胺聚糖含量測(cè)定結(jié)果
        2.9 生物力學(xué)分析與評(píng)分
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 3D打印PCL支架復(fù)合SVF構(gòu)建組織工程軟骨修復(fù)山羊膝關(guān)節(jié)大面積軟骨缺損
    1 材料和方法
        1.1 主要試劑和儀器
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 3D打印PCL支架的制備
            1.3.2 PCL支架的特性和細(xì)胞相容性檢測(cè)
            1.3.3 修復(fù)山羊膝關(guān)節(jié)負(fù)重區(qū)軟骨缺損
            1.3.4 標(biāo)本MRI觀察分析
            1.3.5 標(biāo)本大體觀察
            1.3.6 標(biāo)本組織學(xué)分析
            1.3.7 標(biāo)本生物力學(xué)分析
            1.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 PCL支架的形態(tài)及細(xì)胞相容性
        2.2 標(biāo)本大體觀察
        2.3 標(biāo)本MRI觀察
        2.4 組織學(xué)分析與評(píng)分
        2.5 生物力學(xué)分析與評(píng)分
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3852278