瘢痕疙瘩是創(chuàng)傷愈合最常見的病理形式,特征是超過原始邊界的侵襲性生長(zhǎng)和細(xì)胞外基質(zhì)如膠原蛋白的過度產(chǎn)生,但其病因和機(jī)制尚不清楚。瘢痕疙瘩嚴(yán)重影響外觀和身體功能,缺乏有效的治療方法,且手術(shù)切除后復(fù)發(fā)率高。因此聯(lián)合基因治療成為了新的研究熱點(diǎn)。目前已有許多研究表明,miRNA參與多種病理過程,并在纖維化過程中發(fā)揮重要作用。在這項(xiàng)研究中,我們研究了 miR-152-5p在瘢痕疙瘩中的作用和調(diào)節(jié)機(jī)制。與正常對(duì)照組織及其成纖維細(xì)胞相比,miR-152-5p在瘢痕疙瘩組織和原代成纖維細(xì)胞中表達(dá)均顯著下調(diào)。此外,研究發(fā)現(xiàn)miR-152-5p的下調(diào)與瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖,遷移,侵襲功能和細(xì)胞凋亡率相關(guān)。miR-152-5p的過表達(dá)顯著抑制了瘢痕疙瘩中纖維化的進(jìn)程。Smad3是miR-152-5p的直接靶標(biāo),在瘢痕疙瘩中高表達(dá)。敲低Smad3和過表達(dá)miR-152-5p均可以抑制纖維化進(jìn)展。另外,我們研究發(fā)現(xiàn)miR-152-5p和Smad3,可能是通過調(diào)節(jié)Erkl-2和Jak2/Stat3/Akt途徑及3型膠原蛋白的產(chǎn)生而發(fā)揮作用�？傊�,我們的研究表明參與纖維化進(jìn)展的miR-152-5p/Smad3調(diào)節(jié)途...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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引言
1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)組織
    1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    1.4 常用液體的配置
    1.5 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    1.6 實(shí)驗(yàn)的倫理
2 實(shí)驗(yàn)樣本的入選標(biāo)準(zhǔn)和制備方法
    2.1 組織樣本的選材
    2.2 組織樣本的處理
    2.3 組織樣本總RNA的提取
    2.4 原代細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.5 細(xì)胞樣本總RNA的提取
    2.6 細(xì)胞總蛋白的提取
    2.7 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的制備
    2.8 載體構(gòu)建
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 miR-152-5p在瘢痕疙瘩中表達(dá)水平的變化
    3.2 轉(zhuǎn)染后的表達(dá)變化
    3.3 CCK8實(shí)驗(yàn)
    3.4 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)
    3.5 劃痕實(shí)驗(yàn)
    3.6 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
    3.7 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
    3.8 熒光雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    3.9 WB方法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平變化
    3.10 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析和圖形處理
4 數(shù)據(jù)和結(jié)果
    4.1 第一部分 miR-152-5p對(duì)瘢痕疙瘩纖維化相關(guān)功能的影響及機(jī)制
    4.2 第二部分 Smad3表達(dá)在瘢痕疙瘩纖維化進(jìn)程中的作用
    4.3 第三部分 驗(yàn)證miR-152的靶點(diǎn)Smad3
    4.4 第四部分 miR-152-5p與Smad3在瘢痕疙瘩纖維化中的作用及機(jī)制
5 討論與結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3851883