目的:已知高濃度利多卡因具有潛在的神經(jīng)毒性效應(yīng),擬構(gòu)建利多卡因神經(jīng)細(xì)胞毒性模型,觀察右美托咪定對(duì)高濃度利多卡因神經(jīng)細(xì)胞毒性的表觀遺傳調(diào)控與機(jī)制。方法:首先構(gòu)建體外高濃度利多卡因PC12細(xì)胞毒性模型,觀察細(xì)胞的活力。在右美托咪定與利多卡因聯(lián)合處理48 h后檢測(cè)PC12細(xì)胞活力并計(jì)算增殖抑制率,檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平并檢測(cè)MAPK信號(hào)通路蛋白。通過(guò)文獻(xiàn)查閱和軟件預(yù)測(cè)miR-let-7b及其可能的靶點(diǎn)蛋白COL3A1,驗(yàn)證二者間的關(guān)系,檢測(cè)miR-let-7b對(duì)COL3A1-3’UTR的結(jié)合情況,在利多卡因和右美托咪定聯(lián)合處理后對(duì)細(xì)胞活力,細(xì)胞增殖水平,細(xì)胞凋亡水平,細(xì)胞遷移和侵襲能力,細(xì)胞周期,調(diào)亡蛋白等進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:利多卡因1mM能明顯降低PC12細(xì)胞活力。右美托咪定處理過(guò)的PC12細(xì)胞能夠明顯增加細(xì)胞活力,降低增殖抑制率,抑制細(xì)胞凋亡水平,減少M(fèi)APK信號(hào)通路中的蛋白水平;右美托咪定與過(guò)表達(dá)miR-let-7b、COL3A1沉默表達(dá)均增加細(xì)胞活力、細(xì)胞侵襲和遷移能力,降低增殖抑制率,抑制細(xì)胞凋亡水平,改變細(xì)胞周期,上調(diào)Bcl-2表達(dá),下調(diào)Caspase-3表達(dá)。結(jié)論:右美托咪定可能通過(guò)上調(diào)...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 緒論
    1. 研究背景
        1.1 局麻藥與神經(jīng)毒性
        1.2 體外急性毒性藥物安全性評(píng)價(jià)模型
        1.3 可能的分子作用機(jī)制
        1.4 研究思路
        1.5 研究意義
第二部分 右美托咪定對(duì)利多卡因誘導(dǎo)產(chǎn)生的PC12細(xì)胞毒性的影響
    2.材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 使用儀器
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)與藥物預(yù)處理
        2.4 細(xì)胞增殖水平檢測(cè)
        2.5 蛋白提取和western blotting檢測(cè)
        2.6 細(xì)胞凋亡水平檢測(cè)
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 右美托咪定對(duì)PC12細(xì)胞的安全用藥濃度范圍探索
        3.2 右美托咪定對(duì)利多卡因預(yù)處理后PC12細(xì)胞活力的影響
        3.3 右美托咪定對(duì)利多卡因預(yù)處理后PC12細(xì)胞凋亡水平的影響
        3.4 右美托咪定和利多卡因共同作用下對(duì)MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響
    4. 討論
第三部分 miR-let-7b在右美托咪定減緩利多卡因誘導(dǎo)PC12細(xì)胞毒性效應(yīng)的作用
    2. 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 使用儀器
        2.3 microRNA預(yù)測(cè)
        2.4 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.5 細(xì)胞培養(yǎng)與藥物處理
        2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        2.7 RNA抽提和Real-time RT-PCR檢測(cè)
        2.8 蛋白提取和western blotting檢測(cè)
        2.9 PC12細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.10 流式細(xì)胞術(shù)Edu染色增殖檢測(cè)
        2.11 Hoechest33258染色檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.12 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.13 細(xì)胞遷移與細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)
        2.14 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 miR-let-7b及COL3A1在利多卡因和右美托咪定聯(lián)合給藥處理的PC12中的表達(dá)情況
        3.2 驗(yàn)證miR-let-7b對(duì)COL3A1的調(diào)控作用
        3.3 右美托咪定對(duì)利多卡因誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性的保護(hù)作用的分子機(jī)制研究
    4. 討論
第四部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3805887