發(fā)布時(shí)間：2023-04-25 05:22

　　目的:創(chuàng)傷性顱腦損傷(Traumatic Brain Injury,TBI)后腦血管痙攣(cerebral vasospasm,CVS)是TBI后的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,是引起TBI后腦缺血、腦梗死等繼發(fā)性腦損傷和致死致殘的重要原因,但目前仍尚不清楚其具體發(fā)病機(jī)制。本課題組前期研究證實(shí)小鼠TBI后可釋放腦源性微粒通過破壞的血腦屏障釋放入外周循環(huán)血中,且鼠尾靜脈注射一定數(shù)量腦源性微�？蓪�(dǎo)致小鼠死亡,但病理尸檢未發(fā)現(xiàn)死亡小鼠存在器質(zhì)性致死原因,故推測其致死原因?yàn)檠墀d攣等功能性改變。本研究將在前期研究基礎(chǔ)上,繼續(xù)研究腦源性微粒在小鼠TBI后腦血管痙攣中的作用,檢測其對平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等血管構(gòu)成細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的作用及腦血流量的影響,同時(shí)檢測鈣離子拮抗劑尼莫地平對腦源性微粒介導(dǎo)的腦血管痙攣的治療作用。本研究將闡明TBI后腦血管痙攣的早期發(fā)生機(jī)制,豐富TBI后腦血管痙攣的病生理機(jī)制理論,為TBI后腦血管痙攣的診療提供新思路和理論依據(jù)。方法:(1)體外制備腦源性微粒并進(jìn)行電鏡及粒徑鑒定,鼠尾靜脈注射后測定其半數(shù)致死劑量,為后續(xù)體內(nèi)外深入研究腦源性微粒的病生理機(jī)制提供可靠有效的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。(2)體外...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、鼠尾靜脈注射腦源性微粒后半數(shù)致死劑量的測定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及試劑
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1.3 腦源性微粒的制備、鑒定、計(jì)數(shù)方法、粒徑鑒定和質(zhì)譜分析
        1.1.4 磷脂微粒的制備方法和電鏡鑒定
        1.1.5 SDS處理腦源性微粒的方法和電鏡鑒定
        1.1.6 鼠尾靜脈注射腦源性微粒的預(yù)試驗(yàn)方法
        1.1.7 鼠尾靜脈注射BDMP、磷脂微粒和SDS處理后BDMP后的臨床表和正式試驗(yàn)
        1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 BDMP、磷脂微粒和SDS處理后BDMP的電鏡鑒定；BDMP的粒徑鑒定及質(zhì)譜分析
        1.2.2 腦源性微粒的計(jì)數(shù)
        1.2.3 鼠尾靜脈注射腦源性微粒、磷脂微粒和SDS處理后腦源性微粒的臨床表現(xiàn)
        1.2.4 不同時(shí)間點(diǎn)老鼠的死亡情況
        1.2.5 半數(shù)致死量計(jì)算結(jié)果
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、腦源性微粒收縮頸總動脈導(dǎo)致腦血流量下降的研究
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 腦源性微粒的制備方法和計(jì)數(shù)
        2.1.4 小鼠頸總動脈的分離、固定和預(yù)處理
        2.1.5 腦源性微粒對內(nèi)皮完整的頸總動脈收縮功能的影響
        2.1.6 腦源性微粒對小鼠腦血流灌注量的影響
        2.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 腦源性微�？蓪�(dǎo)致內(nèi)皮完整的頸總動脈收縮
        2.2.2 鼠尾靜脈注射腦源性微�？蓪�(dǎo)致腦血流灌注量降低，而鼠尾靜脈注射磷脂微粒和SDS處理后的腦源性微粒未引起腦血流灌注量降低
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、星形膠質(zhì)細(xì)胞來源微粒細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的影響
    3.1 對象和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.1.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞來源微粒的提取、鑒定和計(jì)數(shù)
        3.1.5 大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組
        3.1.6 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組
        3.1.7 激光共聚焦顯微鏡觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞來源微粒對平滑肌細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞游離鈣離子的熒光強(qiáng)度
        3.1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞來源微粒對平滑肌細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的熒光強(qiáng)度值
        3.1.9 膜片鉗技術(shù)檢測腦源性微粒對平滑肌細(xì)胞鈣離子通道的影響
        3.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定
        3.2.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞來源微粒的電鏡鑒定和計(jì)數(shù)
        3.2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的熒光強(qiáng)度
        3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的熒光強(qiáng)度值
        3.2.5 全細(xì)胞膜片鉗記錄模式檢測可見腦源性微粒促進(jìn)平滑肌細(xì)胞L型電壓門控性鈣離子通道開放
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
四、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)腦源性微粒對細(xì)胞形態(tài)、骨架及蛋白表達(dá)的影響
    4.1 對象和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及試劑
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 腦源性微粒的制備及平滑肌細(xì)胞、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.1.4 離子電導(dǎo)顯微鏡觀察腦源性微粒對平滑肌細(xì)胞形態(tài)的影響
        4.1.5 離子電導(dǎo)顯微鏡觀察腦源性微粒對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的影響
        4.1.6 共聚焦顯微鏡觀察腦源性微粒對平滑肌細(xì)胞骨架影響
        4.1.7 共聚焦顯微鏡觀察腦源性微粒對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架影響
        4.1.8 流式細(xì)胞技術(shù)檢測平滑肌細(xì)胞吞噬微粒的能力
        4.1.9 蛋白免疫印跡檢測腦源性微粒處理平滑肌細(xì)胞后收縮相關(guān)蛋白表達(dá)的變化
        4.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 腦源性微粒對平滑肌細(xì)胞的高度和表面粗糙度的影響
        4.2.2 腦源性微粒對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的高度和表面粗糙度的影響
        4.2.3 腦源性微粒對平滑肌細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的影響
        4.2.4 隨著時(shí)間的延長，平滑肌細(xì)胞吞噬腦源性微粒的數(shù)量增多
        4.2.5 腦源性微�？纱龠M(jìn)平滑肌細(xì)胞肌球蛋白磷酸化表達(dá)
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 顱腦創(chuàng)傷后腦血管痙攣的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3800792