研究背景/目的:骨腫瘤的發(fā)生與干細(xì)胞的增殖與分化失衡有關(guān),但其機制尚未闡明。隨著人類基因組計劃的完成,非編碼RNA對疾病發(fā)生的調(diào)控作用越來越受到關(guān)注,但其機制尚不清楚�；诖�,我們自主研發(fā)并構(gòu)建了具有19個隨機堿基的RNA文庫,用于篩選并鑒定調(diào)控干細(xì)胞增殖與分化失衡的非編碼RNA,并研究相應(yīng)非編碼RNA的具體調(diào)控機制,最終為治療骨腫瘤提供理論和實驗基礎(chǔ)。方法:（1）將具有19個堿基的RNA文庫（n19 RNA library）通過逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)導(dǎo)入鼠胚胎成纖維細(xì)胞（i MEFs）中得到i MEFn19細(xì)胞,以BMP9誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為模型,在體外用BMP9誘導(dǎo)i MEFn19分化,并裸鼠皮下注射異位成骨,3-4周后收取異位成骨包塊,提取可貼壁生長的細(xì)胞,命名為i MEFOR1A（Osteogenic Resistance,OR）細(xì)胞,通過體外擴(kuò)增,繼續(xù)用BMP9誘導(dǎo)其分化并皮下注射,再提取可貼壁細(xì)胞,體內(nèi)外擴(kuò)增和篩選4次,分別命名為i MEFOR1A,i MEFOR1B,i MEFOR1C和i MEFOR1D,以僅導(dǎo)入n19 RNA文庫而未經(jīng)篩選的細(xì)胞（i MEFn19）作為對照。（2）... 

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分：從全基因組水平鑒定并闡述非編碼RNA調(diào)控成骨分化與骨腫瘤發(fā)生的機制
    前言
    第一節(jié) 運用RNA文庫篩選抗成骨分化細(xì)胞
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
        4 實驗小結(jié)
    第二節(jié) 抗成骨分化細(xì)胞的成骨分化能力鑒定
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
        4 實驗小結(jié)
    第三節(jié) 抗成骨分化細(xì)胞基因組DNA測序及單片段鑒定
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
        4 實驗小結(jié)
    第四節(jié) DON對BMP9誘導(dǎo)成骨分化的影響
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
        4 實驗小結(jié)
    第五節(jié) 抗成骨分化細(xì)胞出現(xiàn)的機制探討
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
        4 實驗小結(jié)
    討論
第二部分：LncRNA H19通過Notch信號通路調(diào)控BMP9誘導(dǎo)的干細(xì)胞成骨分化
    前言
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
第三部分：Notch信號通路通過促進(jìn)成骨-成血管偶聯(lián)機制增強BMP9誘導(dǎo)干細(xì)胞成骨分化
    前言
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間的主要學(xué)術(shù)成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Large Noncoding RNAs Are Promising Regulators in Embryonic Stem Cells[J]. Ya-Pu Li,Yangming Wang.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(03)



本文編號：3725614