背景:缺血性心臟病可導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的心肌損傷,并最終導(dǎo)致心力衰竭,是世界范圍內(nèi)死亡的主要原因。及時的恢復(fù)血流灌注可挽救缺血心肌,但再灌注本身也可加重缺血造成的損傷,這一概念被稱為心肌缺血再灌注（I/R）損傷。瑞芬太尼是一種超短效的μ阿片受體激動藥,具有鎮(zhèn)痛效果確切、起效迅速、作用時間短、無蓄積且較少受年齡影響等優(yōu)點(diǎn),因而廣泛用于臨床麻醉,尤其是心血管麻醉。大量基礎(chǔ)和臨床研究表明瑞芬太尼后處理（RPC）可模擬缺血后處理,減輕心肌I/R損傷,發(fā)揮強(qiáng)大的心肌保護(hù)作用。近年來,越來越多的研究表明自噬廣泛參與心肌I/R損傷的發(fā)生發(fā)展,且自噬在缺血階段和再灌注階段起著不同的作用;大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為缺血期間適度的自噬可保護(hù)心肌,而再灌注期間過度的自噬和受損的自噬流則對心肌不利。因而恢復(fù)再灌注期間受損的自噬流成為減輕心肌I/R損傷的一個潛在治療靶點(diǎn)。既往研究已證實(shí)缺血后處理在再灌注早期可激活自噬并促進(jìn)受損的自噬流,發(fā)揮抗I/R損傷的心肌保護(hù)作用。由于RPC可模擬缺血后處理減輕心肌I/R損傷,因此我們推測自噬可能也參與了RPC的抗I/R損傷的心肌保護(hù)作用。本研究擬探討RPC是否可促進(jìn)再灌注期間受損的自噬流,從... 

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動物及細(xì)胞株
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法與內(nèi)容
        2.4.1 大鼠在體實(shí)驗(yàn)
            2.4.1.1 在體制備大鼠心肌I/R損傷模型
            2.4.1.2 實(shí)驗(yàn)分組與給藥
            2.4.1.3 大鼠血清肌鈣蛋白 I(Cardiac troponin I, cTnI)濃度的測定
            2.4.1.4 大鼠心肌梗死體積的測定
            2.4.1.5 大鼠心肌組織免疫熒光檢測
            2.4.1.6 大鼠心肌組織Western blot檢測
        2.4.2 H9c2心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
            2.4.2.1 培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞
            2.4.2.2 心肌細(xì)胞H/R損傷模型的建立及RPC處理
            2.4.2.3 實(shí)驗(yàn)分組
            2.4.2.4 心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.4.2.5 CCK-8 法檢測心肌細(xì)胞活力
            2.4.2.6 細(xì)胞免疫熒光檢測
            2.4.2.7 心肌細(xì)胞 Western blot 檢測
            2.4.2.8 H9c2 心肌細(xì)胞 HO/PI 染色
    2.5 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 RPC對大鼠心肌I/R損傷引起自噬的影響
        3.1.1 RPC對再灌注早期LC3點(diǎn)聚集的影響
        3.1.2 RPC對再灌注早期LC3Ⅱ和p62 蛋白表達(dá)的影響
        3.1.3 RPC 對再灌注早期自噬體和溶酶體融合的影響
        3.1.4 RPC對心肌I/R損傷自噬流的影響
        3.1.5 CQ 對 RPC 抗心肌 I/R 損傷的保護(hù)作用的影響
        3.1.6 CQ對RPC抗心肌凋亡作用的影響
    3.2 RPC對 H9c2 心肌細(xì)胞H/R損傷引起自噬的影響
        3.2.1 RPC對復(fù)氧早期自噬體形成的影響
        3.2.2 RPC 對復(fù)氧早期自噬體和溶酶體融合的影響
        3.2.3 RPC對復(fù)氧不同時間自噬流的影響
        3.2.4 RPC對復(fù)氧不同時間細(xì)胞活力的影響
        3.2.5 Baf對 RPC促進(jìn)H/R損傷自噬流的影響
        3.2.6 CQ對 RPC促進(jìn)H/R損傷自噬流的影響
        3.2.7 Baf對 RPC抗 H/R損傷的保護(hù)作用的影響
        3.2.8 CQ對 RPC抗 H/R損傷的保護(hù)作用的影響
        3.2.9 心肌細(xì)胞ATG7基因敲低效應(yīng)的驗(yàn)證
        3.2.10 ATG7 基因敲低對 RPC 心肌保護(hù)作用的影響
4 討論
    4.1 大鼠心肌I/R損傷和H9c2 心肌細(xì)胞H/R損傷模型的建立
        4.1.1 大鼠心肌I/R損傷模型的建立
        4.1.2 H9c2心肌細(xì)胞H/R損傷模型的建立
    4.2 瑞芬太尼劑量的選擇
        4.2.1 瑞芬太尼用于大鼠心肌I/R損傷的劑量選擇
        4.2.2 瑞芬太尼用于心肌細(xì)胞H/R損傷的劑量選擇
    4.3 慢病毒載體介導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞ATG7基因敲低
    4.4 自噬參與RPC介導(dǎo)的心肌保護(hù)作用
    4.5 RPC增強(qiáng)自噬流保護(hù)心肌的機(jī)制研究
        4.5.1 LC3和p62在心肌I/R損傷中的作用
        4.5.2 Beclin1 在心肌I/R損傷中的作用
        4.5.3 LAMP2 在心肌I/R損傷中的作用
    4.6 下一步研究計劃
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
附錄
    個人簡歷
        1.基本信息
        2.受教育經(jīng)歷
        3.工作經(jīng)歷
        4.博士期間發(fā)表的科研論文
致謝
綜述 自噬在心肌缺血再灌注損傷中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Autophagy: a double-edged sword for neuronal survival after cerebral ischemia[J]. Wenqi Chen,Yinyi Sun,Kangyong Liu,Xiaojiang Sun.  Neural Regeneration Research. 2014(12)



本文編號：3667228