目的:瞬時(shí)受體電位香草酸亞型1（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）是Ca²⁺高通透性的非選擇性陽離子通道,可以被細(xì)胞腫脹、低滲透壓、高溫（>43℃）、低pH（<6.0）等刺激以及內(nèi)源性或合成的配體激活。近期研究發(fā)現(xiàn),在缺血性腦中風(fēng)模型中TRPV1表達(dá)升高,抑制TRPV1在缺血性腦中風(fēng)的病理生理過程中具有保護(hù)作用,但其具體機(jī)制尚不明確。此外,抑制TRPV1在創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury,TBI）中是否具有神經(jīng)保護(hù)作用以及其潛在的分子生物學(xué)機(jī)制尚缺乏研究。因此,我們選用TBI小鼠模型,研究抑制TRPV1是否對(duì)TBI后神經(jīng)功能缺損和血腦屏障（blood–brain barrier,BBB）破壞具有保護(hù)作用,并對(duì)其潛在的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行探究。方法:本研究采用C57BL/6小鼠,應(yīng)用控制性皮層損傷（controlled cortex impact,CCI）模型進(jìn)行TBI建模,腹腔注射TRPV1的特異性抑制劑辣椒平（capsazepine,CPZ;1微摩爾/千克體重,2次/... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞索引
第一章 緒論
第二章 TRPV1 在創(chuàng)傷性腦損傷后表達(dá)升高
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)耗材
            2.1.5 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 主要試劑配制
            2.2.2 免疫熒光染色分析
            2.2.3 小鼠控制性皮層損傷(CCI)模型的建立
            2.2.4 小鼠CCI模型病理檢查鑒定
            2.2.5 總RNA提取和RT-qPCR
            2.2.6 Western Blot檢測
            2.2.7 神經(jīng)元的原代分離和培養(yǎng)
            2.2.8 星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代分離和培養(yǎng)
            2.2.9 細(xì)胞牽張損傷模型(SI)的建立
            2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 TRPV1 在腦組的內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)
        3.2 TRPV1在TBI后小鼠腦組織中m RNA水平上表達(dá)升高
        3.3 TRPV1 在 TBI 后小鼠腦組織中蛋白水平上表達(dá)升高
        3.4 神經(jīng)元牽張損傷(SI)建模后的形態(tài)學(xué)變化
        3.5 神經(jīng)元細(xì)胞牽張損傷(SI)后 TRPV1 表達(dá)升高
        3.6 bEnd.3 細(xì)胞在牽張損傷(SI)后TRPV1 表達(dá)升高
        3.7 星形膠質(zhì)細(xì)胞牽張損傷(SI)后TRPV1 表達(dá)升高
    4.討論
    5.結(jié)論
第三章 抑制TRPV1減少創(chuàng)傷性腦損傷后的神經(jīng)元凋亡并提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)耗材
            2.1.5 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 主要試劑配制
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2.3 小鼠控制性皮層損傷(CCI)模型的建立
            2.2.4 mNSS神經(jīng)功能缺損評(píng)分
            2.2.5 小鼠轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 小鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 TUNEL和 NeuN原位雙標(biāo)檢測神經(jīng)元凋亡
            2.2.8 免疫熒光染色檢測TRPV1在SH-SY5Y細(xì)胞中的表達(dá)
            2.2.9 SH-SY5Y細(xì)胞牽張損傷(SI)模型的建立
            2.2.10 LDH釋放檢測
            2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測牽張損傷后SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
            2.2.12 Fluo-4 AM檢測牽張損傷(SI)后SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化
            2.2.13 Western Blot檢測CPZ處理對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞牽張損傷后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            2.2.14 Western Blot檢測CPZ處理對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞牽張損傷后MAPK通路的影響
            2.2.15 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 抑制TRPV1 改善小鼠TBI后神經(jīng)功能缺損
        3.2 抑制TRPV1 提高小鼠TBI后轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3 抑制TRPV1 提高TBI后小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力
        3.4 CPZ抑制TRPV1 減少TBI后小鼠腦組織神經(jīng)元的凋亡
        3.5 TRPV1 在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y細(xì)胞中表達(dá)
        3.6 確定CPZ作用于SH-SY5Y細(xì)胞的最適濃度
        3.7 CPZ處理后減少牽張損傷引起的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
        3.8 CPZ抑制TRPV1 減少牽張損傷引起的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加
        3.9 抑制TRPV1 減少SH-SY5Y細(xì)胞牽張損傷(SI)引起的促凋亡蛋白的表達(dá)
        3.10 抑制TRPV1 調(diào)節(jié)機(jī)械牽張損傷(SI)引起的MAPK通路中磷酸化JNK和p38的表達(dá)
    4.討論
    5.結(jié)論
第四章 抑制TRPV1 減輕創(chuàng)傷性腦損傷后血腦屏障的破壞
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)耗材
            2.1.5 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 主要試劑配制
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2.3 小鼠控制性皮層損傷(CCI)模型的建立
            2.2.4 小鼠頭部磁共振掃描及水腫體積計(jì)算
            2.2.5 小鼠腦組織含水量的檢測
            2.2.6 小鼠腦組織伊文思藍(lán)(Evans Blue)滲出量測定
            2.2.7 小鼠腦組織血紅蛋白含量測定
            2.2.8 免疫熒光染色分析
            2.2.9 Western Blot檢測
            2.2.10 bEnd.3細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.11 bEnd.3細(xì)胞牽張損傷(SI)模型的建立
            2.2.12 bEnd.3細(xì)胞牽張損傷(SI)后LDH釋放檢測
            2.2.13 TUNEL染色原位檢測腦組織細(xì)胞凋亡
            2.2.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測牽張損傷后bEnd.3 細(xì)胞的凋亡
            2.2.15 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
            2.2.16 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 抑制TRPV1 減輕小鼠TBI后腦組的水腫
        3.2 抑制TRPV1 減少小鼠TBI后腦組出血量
        3.3 CPZ抑制TRPV1 減輕小鼠TBI后血腦屏障(BBB)的破壞
        3.4 抑制TRPV1 減少小鼠TBI后緊密連接蛋白的丟失
        3.5 抑制TRPV1 減少小鼠TBI后腦組織細(xì)胞的凋亡
        3.6 確定CPZ作用于b End.3 細(xì)胞的最適濃度
        3.7 抑制TRPV1 減少牽張損傷導(dǎo)致的bEnd.3 細(xì)胞ZO-1 的丟失
        3.8 抑制TRPV1 減少牽張損傷引起的bEnd.3 細(xì)胞凋亡
        3.9 siRNA干擾TRPV1后CPZ對(duì) bEnd.3 細(xì)胞牽張損傷后的保護(hù)作用消失
        3.10 抑制TRPV1 減少bEnd.3 細(xì)胞牽張損傷(SI)引起的促凋亡蛋白的表達(dá)
        3.11 抑制TRPV1 降低牽張損傷(SI)后bEnd.3 細(xì)胞MAPK通路中JNK和 p38磷酸化水平
    4.討論
    5.結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J]. WEI ZHANG, Hui Tu LIU The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of Ministry of Education, College of Life Sciences, Beijing Normal University, Beijing 100875, China.  Cell Research. 2002(01)



本文編號(hào)：3641644