目的:Ski作為一種進(jìn)化保守蛋白,廣泛分布于不同的組織和細(xì)胞,涉及多種細(xì)胞過程。前期研究發(fā)現(xiàn),Ski在脊髓損傷后反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和遷移過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥活化是其增殖和遷移的重要因素。然而,Ski在星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥活化中的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究目的是分析Ski在星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用,及其對星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥因子釋放的影響。方法:取新生3d內(nèi)Sprague-Dawley大鼠大腦皮質(zhì)分離星形膠質(zhì)細(xì)胞,體外培養(yǎng)。使用GFAP抗體進(jìn)行免疫熒光染色鑒定純度后,用1μg/ml脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞建立炎癥模型,通過Western blot技術(shù)觀察Ski、GFAP和iNOS蛋白表達(dá)變化,ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β和IL-6釋放水平。然后將細(xì)胞分為空白對照組、陰性對照組、SkisiRNA組,觀察Ski沉默后對LPS誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)炎癥活化的影響。結(jié)果:免疫熒光染色鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞純度大于98%,符合實(shí)驗(yàn)要求。給予LPS刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,Ski在LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中升高,... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

倒置顯微鏡下觀察純化后星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)

圖 1 倒置顯微鏡下觀察純化后星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)GFAP 是星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，因此，我們采用 GFAP 免疫熒光染色檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞純度。GFAP 陽性細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)比例為星形膠質(zhì)細(xì)胞純度。如圖 2 所示，星形膠質(zhì)細(xì)胞純度達(dá)到 98%以上，符合實(shí)驗(yàn)的要求。

碩士學(xué)位論文 Ski 在大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥活化中S 誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞 Ski 表達(dá)了研究 LPS 對星形膠質(zhì)細(xì)胞中 Ski 表達(dá)的影響，本實(shí)驗(yàn)中，我們形膠質(zhì)細(xì)胞。如圖 3 所示，1μg/ml LPS 作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞 0hh 后，Westernblot 結(jié)果提示，LPS 刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞 3h 后 Sk低；刺激 6 h 后, Ski 表達(dá)逐漸升高；在 12h 時(shí)，Ski 表達(dá)明顯升達(dá)達(dá)高峰。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3609431