研究背景:我們前期的研究表明:脊髓損傷（SCI）局部微環(huán)境中早期可檢測到神經(jīng)損害性的M1型巨噬細(xì)胞和神經(jīng)保護(hù)性的M2型巨噬細(xì)胞,但損傷一周后M1細(xì)胞占絕對優(yōu)勢,而M2細(xì)胞比例則很少;采用M2細(xì)胞過繼免疫可以提高損傷局部M2細(xì)胞的比例,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。但是,其機(jī)制尚不清楚。研究證實(shí),SCI的一周前后是炎癥反應(yīng)最重的時間段,因此,本研究擬以SCI后7D為時間點(diǎn),分析M2細(xì)胞過繼回輸對損傷局部基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響,為SCI的臨床治療提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:采用RNA-Seq技術(shù),以SCI后7D為時間點(diǎn),分析M2細(xì)胞過繼回輸對損傷局部基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響;生物信息學(xué)分析,篩選、鑒定出關(guān)鍵分子和信號通路。方法:（1）分離成年SD大鼠的股骨骨髓,用L929條件培養(yǎng)基培養(yǎng)出骨髓來源的巨噬細(xì)胞（即M0細(xì)胞）,通過條件誘導(dǎo)分別得到M1和M2型巨噬細(xì)胞;（2）采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光染色法鑒定M0、M1和M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志;（3）RNA-Seq分析M0、M1、M2巨噬細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)（4）熒光定量PCR驗(yàn)證RNA-Seq結(jié)果;（5）采用紐約大學(xué)NYU重物損傷儀制備SD大鼠脊髓損傷模型,并在當(dāng)天過... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

0、M1、M2細(xì)胞的鑒定Figure1CharacteristicsofM0,M1,andM2macrophagesdeterminedbyIHCandFCMA.M0細(xì)胞流式結(jié)果，B.M1細(xì)胞流式結(jié)果C.M2細(xì)胞流式結(jié)果，D.M0細(xì)胞熒光染色結(jié)果，E.M1細(xì)胞熒光染色結(jié)果，F(xiàn)M2細(xì)胞熒光染色結(jié)果，G.M0、M1、M2細(xì)胞CD86、CD163、CD68、Arg1和CCR7陽性細(xì)胞統(tǒng)計結(jié)果.其中，n=5.*P<0.05,**P<0.01(ANOVA).

3.2.3 主成分分析法(PCA)對基因的變異源進(jìn)行分析：PCA （Principal Component Analysis）即主成分分析法，為了闡述我們原始數(shù)據(jù)中的變異源，我們對前 3 個主成分（PC1、PC2 和 PC3）進(jìn)行 PCA 分析。如圖 1所示，PC 分?jǐn)?shù)點(diǎn)顯示 PC1、PC2 和 PC3 分別是 32.17%、23.03%和 16.78%。我們體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞的 3 個獨(dú)立樣本距離較近，而不同顏色的樣本距離較遠(yuǎn)，說明我們的樣本變異程度較低，可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

3.2.4 M0、M1、M2 巨噬細(xì)胞差異基因的表達(dá)我們分別用 RPKM（Reads Per Kilobase per Million mapped reads）和 DEGSeq 檢測基因的表達(dá)水平和差異基因的表達(dá)。與 M0 組相比，M1組有 3612 個差異表達(dá)基因, 包括 1701 個上調(diào)基因和 1911 個下調(diào)基因（圖 3A），在 M2組中有 2749個差異表達(dá)基因,其中 893 個上調(diào)基因和 1856 個下調(diào)的基因（圖 3B）；M1和M2組之間有 3565 個差異表達(dá)基因，包括 1533 個上調(diào)基因和 2032 個下調(diào)的基因（圖 3C）。


本文編號：3600170