發(fā)布時(shí)間：2022-01-20 18:39

　　研究背景:骨肉瘤（ostesarcoma,OS）是兒童和青少年中最常見(jiàn)的原發(fā)性實(shí)體骨惡性腫瘤。由于缺乏有效的診斷方法,首次確診時(shí)多數(shù)已達(dá)中晚期,肺轉(zhuǎn)移率高達(dá)約20%。在過(guò)去的25年中,得益于手術(shù)和化療的聯(lián)合治療,骨肉瘤患者的5年無(wú)瘤生存率提高到了 60-75%。然而,腫瘤轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)的患者臨床預(yù)后仍較差。這迫切需求我們找出更效的骨肉瘤早期診斷、治療和預(yù)后策略。高通量測(cè)序分析結(jié)果表明,98%的人類基因組可以轉(zhuǎn)錄成非編碼RNA,其中長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,IncRNA）不能被翻譯成蛋白質(zhì),但這并不意味著IncRNA是無(wú)用的,更多的證據(jù)支持lncRNA在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá),參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡和腫瘤發(fā)生等活動(dòng)。特別是IncRNA通過(guò)表觀遺傳沉默、mRNA剪接、IncRNA-miRNA相互作用、IncRNA-蛋白相互作用等方式發(fā)揮癌基因或腫瘤抑制因子的作用。在本研究中,我們通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)9對(duì)骨肉瘤及其匹配的癌旁組織,結(jié)果顯示:DNAJC3-AS1在骨肉瘤組織中異常高表達(dá),我們通過(guò)擴(kuò)大樣本量加以驗(yàn)證,并通過(guò)增高或降低DNAJC... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

7.L2一ID戊刁J〔習(xí)刊s1

３．１?Ｚ＞；ＶＡ／ＣＪ?在骨肉瘤標(biāo)本和細(xì)胞系中表達(dá)相對(duì)增髙??采用ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)３０對(duì)骨肉瘤標(biāo)本以及其配對(duì)的癌旁組織中ＺＷ乂７Ｃ３?＿??的表達(dá)量。如圖３．１Ａ所示，與配對(duì)的癌旁組織相比，ＩＷＡ／Ｃ３?在骨肉??瘤組織中表達(dá)量增加〇Ｐ＜０．０ｉ）。另外，與細(xì)胞系相比，－ＡＳ７??在骨肉瘤細(xì)胞系（ＳＡＯＳ－２和ＨＯＳ）中的表達(dá)量也升高（圖３．１Ｂ）。此外，我們??還評(píng)估了?沿表達(dá)量的亞細(xì)胞位置，分析顯示：ＩＷＡ／ＣＵ幻主要定位??于細(xì)胞核中（圖３．１Ｃ），該結(jié)果提示ＤｉＶＡ／ｄＡＳｉ在骨肉瘤組織中異常高表達(dá)，并??且集中分布在細(xì)胞核中，可能是骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。??Ａ｜?〇．〇３ｉ?＊＊?Ｂ．含?Ｃ?１〇〇］｜—｜?門(mén)?｜￣｜｜—｜「ｊ「｜?■?ｎｕｃ｜ｅａｒ??Ｅ?乏?４－?２?０．００８ｉ?女?３?８〇?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??＿ｌＥｊｐ圓??。＾?ＨＯＳ?ＳＡＯＳ－２??圖３．１在骨肉瘤標(biāo)本和細(xì)胞系中ＩＷＡ／ＣＪ－ｄＳｉ的表達(dá)水平升髙。Ａ．將￡Ｗ兒Ｏ－乂Ｓ７在骨肉??瘤標(biāo)本（ｎ＝３０）中的表達(dá)與配對(duì)的癌旁組織標(biāo)本（ｎ＝３０）中的表達(dá)水平進(jìn)行比較。Ｂ．將??ＺＷＸＯ－ＡＳ７在ＨＯＳ和ＳＡＯＳ－２中的表達(dá)水平與ｈＦＯＢ１．１９中的表達(dá)水平進(jìn)行比較。Ｃ？利用??ｑＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)在ＨＯＳ和ＳＡＯＳ－２細(xì)胞中對(duì)ＺＷＡ／Ｃ３－ＡＳ７進(jìn)行亞細(xì)胞定位。所有數(shù)據(jù)用平均??數(shù)＋標(biāo)準(zhǔn)差表示。在三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果是可重復(fù)的。＊尸＜０．０５，?＊＊尸＜〇．０／，?＊＊＊ｐ＜??０．００１?〇??Ｆｉｇ３．１?Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ?ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?ｅｘｈｉｂ

??導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞系中ＤＮＡＪＣ３?ｍＲＮＡ表達(dá)水平的升高或降低（圖３．３Ｂ和圖Ｓ１Ｂ）。??８０，?２．０，?＊＊??〇）＜?６０?＊＊＊?Ｓｇ１－５－門(mén)?＊＊??ｐｄｌＬｌｉａｎ＾?：：ｉｙｙｎｎ??圖３．３利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建過(guò)表達(dá)或下調(diào)￡＞／Ｖ／丨的ＨＯＳ細(xì)胞系。（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ??檢測(cè)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的ＨＯＳ細(xì)胞屮Ｄ／ＶＡ／ＣＭＳ／表達(dá)ｍ的相對(duì)改變倍數(shù)。（Ｂ）通過(guò)ｑＲＴ－ＰＣＲ檢??測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的ＨＯＳ細(xì)胞屮Ｄ／ＶＡ／Ｃ＿５的表達(dá)丨卩．：的殳化。我們將上調(diào)ＬｎｃＲＮＡ?ＤＡ＾ＪＣＵＳ／表??達(dá)的細(xì)胞系定義為ｕｐ－Ｌｎｃ，下調(diào)ＬｎｃＲＮＡ?ＤＭ４ＪＣＵ５７表達(dá)的細(xì)胞系定義為ｓｈ－ＲＮＡＩ或??Ｓｈ－ＲＮＡ２，將其各自的對(duì)照組定義為ｕｐ－ｃｔｄ和ｓｈ－ｃｔｒｌ。所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)＋標(biāo)準(zhǔn)差表示。在??三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中


本文編號(hào)：3599323