目的:探究他克莫司通過下調(diào)miR-429抑制人成纖維細胞增殖來預(yù)防瘢痕粘連的作用及其潛在的作用機制。方法:為了確定術(shù)后瘢痕組織中miR-429的表達情況,我們將取自人體術(shù)后瘢痕組織中提取的RNA進行了qRT-PCR檢測;并將體外培養(yǎng)的人成纖維細胞,分別用0μM和50μM濃度的FK-506溶液處理24h,也采用qRT-PCR檢測用兩者結(jié)果分析他克莫司作用對人成纖維細胞中miR-429的影響。采用Western-blot檢測了人瘢痕成纖維細胞在轉(zhuǎn)染miR-429模擬物和對照物后PTEN表達量的變化。通過在線miRNA靶點預(yù)測數(shù)據(jù)庫,預(yù)測了潛在的miR-429的靶標基因PTEN,并依據(jù)預(yù)測的位點構(gòu)建了PTEN’3-UTR的野生型、突變型質(zhì)粒,之后采用雙熒光素酶報告檢測確定miR-429和PTEN的靶向關(guān)系。將FK-506作用的成纖維細胞分為濃度組（0,5,10,25,50,100μM）和時間組（0,12,24,36,48,60h）,通過CCK-8實驗檢測FK-506對體外培養(yǎng)的人成纖維細胞增殖活性的影響。將經(jīng)過FK-506處理和miR-429慢病毒轉(zhuǎn)染的成纖維細胞進行不同分組（對照組,FK-... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

從人體癱痕組織中分離、培養(yǎng)的成纖維細胞鏡下形態(tài)，x1000

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.實驗結(jié)果3.1 FK-506 能降低 miR-429 在人成纖維細胞中的表達為了確定人瘢痕組織中 miR-429 的表達情況，我們將樣本組織中提取的 RNA 進行了qRT-PCR 檢測，并將不同樣本組織分組進行了對比，結(jié)果根據(jù)圖 1-2 顯示的情況，人瘢痕組織中 miR-429 相對正常組織中 miR-429 的表達增加。為了確定他克莫司對人成纖維細胞中 miR-429 表達的影響，我們用 50μM 的 FK-506 單次施用 5 分鐘處理人成纖維細胞，之后立即用 PBS 洗滌三次，隨后培養(yǎng) 24h，然后使用 qRT-PCR 測 miR-429 的表達。結(jié)果如圖 1-3 顯示，經(jīng)過 FK-506 處理的纖維細胞中 miR-429 的水平顯著低于對照成纖維細胞中的水平。這些結(jié)果表明 FK-506 可以下調(diào)人成纖維細胞中 miR-429 的表達。

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.實驗結(jié)果3.1 FK-506 能降低 miR-429 在人成纖維細胞中的表達為了確定人瘢痕組織中 miR-429 的表達情況，我們將樣本組織中提取的 RNA 進行了qRT-PCR 檢測，并將不同樣本組織分組進行了對比，結(jié)果根據(jù)圖 1-2 顯示的情況，人瘢痕組織中 miR-429 相對正常組織中 miR-429 的表達增加。為了確定他克莫司對人成纖維細胞中 miR-429 表達的影響，我們用 50μM 的 FK-506 單次施用 5 分鐘處理人成纖維細胞，之后立即用 PBS 洗滌三次，隨后培養(yǎng) 24h，然后使用 qRT-PCR 測 miR-429 的表達。結(jié)果如圖 1-3 顯示，經(jīng)過 FK-506 處理的纖維細胞中 miR-429 的水平顯著低于對照成纖維細胞中的水平。這些結(jié)果表明 FK-506 可以下調(diào)人成纖維細胞中 miR-429 的表達。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]喉內(nèi)植入硅膠膜預(yù)防和治療雙側(cè)聲帶粘連[J]. 陳健,吳海濤,程磊,何培杰.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2018(23)
[2]Mitomycin C induces apoptosis in human epidural scar fibroblasts after surgical decompression for spinal cord injury[J]. Tao Sui,Da-wei Ge,Lei Yang,Jian Tang,Xiao-jian Cao,Ying-bin Ge.  Neural Regeneration Research. 2017(04)



本文編號：3580384