目的:通過軟骨細(xì)胞體外研究及基因敲除小鼠的體內(nèi)研究探索Ihh在腰椎軟骨終板退變及異常鈣化中的作用及其機(jī)制。方法:第一部分Ihh對(duì)體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞異常鈣化退變的作用及機(jī)制研究1.獲取C57小鼠肋軟骨細(xì)胞,通過番紅O固綠染色、HE染色及免疫組化檢測(cè)Ⅱ型膠原的表達(dá)來(lái)鑒定軟骨細(xì)胞。2.通過RT-PCR分別檢測(cè)ihh高表達(dá)組、ihh信號(hào)通路抑制組和空白對(duì)照組中的COLII、COLX、Runx2、OCN、ALP、AGG、ANKH、ENPP1等因子的mRNA表達(dá)差異。3.利用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)抑制ihh和高表達(dá)ihh后對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡的影響。第二部分Ihh條件性基因敲除小鼠腰椎軟骨終板異常鈣化退變的分析研究1.利用ihhfUfl/fl;rosa和prxl-cre;ihhfl/-;rosa基因小鼠繁育出ihh-/-基因敲除小鼠并將其作為實(shí)驗(yàn)組,將ihhfl/f1基因小鼠作為對(duì)照組,觀察各組基因小鼠大體形態(tài);X線觀察小鼠脊柱椎體高度的變化。2.micro-CT掃描各組基因小鼠的腰1-2椎間盤,觀察結(jié)構(gòu)模型指數(shù)、骨小梁數(shù)目、骨小梁厚度、骨小梁分離度等指標(biāo)的變化。3.利用RT-PCR分別檢測(cè)各組基因小鼠腰椎終... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細(xì)胞的鑒定

A B C圖 2.2 軟骨細(xì)胞的鑒定2.2 細(xì)胞形態(tài)變化空白對(duì)照組(圖 A)可觀察到軟骨細(xì)胞表現(xiàn)為橢圓形或者圓形，ihh 高表達(dá)組（圖B）細(xì)胞形態(tài)變化不明顯，ihh 信號(hào)通路抑制組（圖 C）軟骨細(xì)胞則生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)受損，有部分細(xì)胞皺縮，并且核固縮現(xiàn)象明顯，出現(xiàn)單個(gè)的懸浮細(xì)胞。

檢測(cè)：Annexin V FITC/PI 雙染結(jié)果顯示對(duì)照組凋亡率為凋亡率為 8.34±0.22，ihh 信號(hào)通路抑制組凋亡率為 14.組凋亡率高于對(duì)照組并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ihh 高表達(dá)組凋計(jì)學(xué)意義（P<0.05）空白對(duì)照組 ihh 高表達(dá)組組 ihh 信號(hào)

【參考文獻(xiàn)】：
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