目的:紫杉醇是有效的抗腫瘤藥物,已被廣泛應用于多種癌癥的治療中,但紫杉醇對骨巨細胞瘤（Giant Cell Tumor of Bone,GCTB）細胞的抗增殖和促凋亡的作用機制尚不明確。因此,本研究旨在評價紫杉醇對骨巨細胞瘤的抗腫瘤能力及其潛在的信號轉(zhuǎn)導機制。方法:首先,使用CCK-8試劑盒和流式細胞術(shù)測定紫杉醇對HS737.T細胞生存和凋亡的影響。接下來通過RNA-seq和生物信息學技術(shù)確定差異表達基因（Differentially Expressed Genes,DEGs）,分析相關(guān)通路,并采用實時定量聚合酶鏈反應（Quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）驗證部分DEGs的準確性。然后采用ClueGO技術(shù)解碼和可視化GO Terms,繪制DEGs的蛋白-蛋白相互作用（Protein-Protein Interaction,PPI）網(wǎng)絡(luò)圖。用蛋白免疫印跡（Western Blotting,WB）驗證差異表達基因、Caspase-3和PARP1的裂解水平、p53磷酸化水平以及TP53INP1表達水平。最后,采用R... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

紫杉醇的分子結(jié)構(gòu)

127.流式細胞儀檢測，AnnexinV-FITC為綠色熒光，PI為紅色熒光。實驗結(jié)果一、紫杉醇抑制HS737.T細胞的增殖與生存CCK-8試劑盒的細胞活力實驗結(jié)果表明：紫杉醇對HS737.T細胞增殖和生存有抑制作用。實驗數(shù)據(jù)提示，經(jīng)不同濃度梯度紫杉醇處理后，與對照組細胞相比，細胞生存率隨藥物濃度的增加而顯著降低。根據(jù)所測抑制率計算HS737.T細胞的IC50值僅為9.78ng/ml，而長春新堿對HS737.T細胞的IC50為24.5ng/ml(圖2A)，紫杉醇的半抑制濃度遠低于長春新堿，因而紫杉醇對HS737.T細胞有較好的藥物作用效果，同時IC50值也為后續(xù)實驗中紫杉醇藥物濃度的確定提供參考。在10ng/ml紫杉醇作用下，細胞的抑制作用隨作用時間的增加而增加(圖2B)。圖2紫杉醇對骨巨細胞瘤細胞活性的影響Figure2.ImpactofpaclitaxelontheviabilityofGCTB

13二、紫杉醇促進HS737.T細胞凋亡與未經(jīng)藥物處理的對照組細胞相比，經(jīng)紫杉醇處理后，HS737.T細胞的細胞凋亡明顯增加。分別使用藥物濃度為5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的紫杉醇作用于HS737.T細胞12h后，經(jīng)流式細胞儀測得的凋亡率分別為27.03%、37.90%、52.16%(圖3A、B)。這一結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加，HS737.T細胞的凋亡率增加，進一步揭示了紫杉醇可誘導HS737.T細胞的凋亡。圖3紫杉醇對骨巨細胞瘤細胞凋亡的影響Figure3.ImpactofpaclitaxelontheapoptosisofGCTB


本文編號：3562061