目的:紫杉醇是有效的抗腫瘤藥物,已被廣泛應(yīng)用于多種癌癥的治療中,但紫杉醇對(duì)骨巨細(xì)胞瘤（Giant Cell Tumor of Bone,GCTB）細(xì)胞的抗增殖和促凋亡的作用機(jī)制尚不明確。因此,本研究旨在評(píng)價(jià)紫杉醇對(duì)骨巨細(xì)胞瘤的抗腫瘤能力及其潛在的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法:首先,使用CCK-8試劑盒和流式細(xì)胞術(shù)測定紫杉醇對(duì)HS737.T細(xì)胞生存和凋亡的影響。接下來通過RNA-seq和生物信息學(xué)技術(shù)確定差異表達(dá)基因（Differentially Expressed Genes,DEGs）,分析相關(guān)通路,并采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）驗(yàn)證部分DEGs的準(zhǔn)確性。然后采用ClueGO技術(shù)解碼和可視化GO Terms,繪制DEGs的蛋白-蛋白相互作用（Protein-Protein Interaction,PPI）網(wǎng)絡(luò)圖。用蛋白免疫印跡（Western Blotting,WB）驗(yàn)證差異表達(dá)基因、Caspase-3和PARP1的裂解水平、p53磷酸化水平以及TP53INP1表達(dá)水平。最后,采用R... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

紫杉醇的分子結(jié)構(gòu)

127.流式細(xì)胞儀檢測，AnnexinV-FITC為綠色熒光，PI為紅色熒光。實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、紫杉醇抑制HS737.T細(xì)胞的增殖與生存CCK-8試劑盒的細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：紫杉醇對(duì)HS737.T細(xì)胞增殖和生存有抑制作用。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示，經(jīng)不同濃度梯度紫杉醇處理后，與對(duì)照組細(xì)胞相比，細(xì)胞生存率隨藥物濃度的增加而顯著降低。根據(jù)所測抑制率計(jì)算HS737.T細(xì)胞的IC50值僅為9.78ng/ml，而長春新堿對(duì)HS737.T細(xì)胞的IC50為24.5ng/ml(圖2A)，紫杉醇的半抑制濃度遠(yuǎn)低于長春新堿，因而紫杉醇對(duì)HS737.T細(xì)胞有較好的藥物作用效果，同時(shí)IC50值也為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中紫杉醇藥物濃度的確定提供參考。在10ng/ml紫杉醇作用下，細(xì)胞的抑制作用隨作用時(shí)間的增加而增加(圖2B)。圖2紫杉醇對(duì)骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞活性的影響Figure2.ImpactofpaclitaxelontheviabilityofGCTB

13二、紫杉醇促進(jìn)HS737.T細(xì)胞凋亡與未經(jīng)藥物處理的對(duì)照組細(xì)胞相比，經(jīng)紫杉醇處理后，HS737.T細(xì)胞的細(xì)胞凋亡明顯增加。分別使用藥物濃度為5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的紫杉醇作用于HS737.T細(xì)胞12h后，經(jīng)流式細(xì)胞儀測得的凋亡率分別為27.03%、37.90%、52.16%(圖3A、B)。這一結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加，HS737.T細(xì)胞的凋亡率增加，進(jìn)一步揭示了紫杉醇可誘導(dǎo)HS737.T細(xì)胞的凋亡。圖3紫杉醇對(duì)骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的影響Figure3.ImpactofpaclitaxelontheapoptosisofGCTB


本文編號(hào)：3562061