發(fā)布時間：2021-12-30 18:42

　　目的:在整形外科手術中,骨缺損的有效重建仍然是臨床醫(yī)生面臨的一項嚴峻挑戰(zhàn)。然而當前仍無有效的方法能夠解決此難題。再生醫(yī)學的迅速發(fā)展為臨床骨缺損的治療提供新的選擇,實現(xiàn)干細胞定向成骨分化是骨再生需解決的關鍵技術。在一些前瞻性的臨床試驗研究中,以脂肪來源血管基質成分（Stromal vascular fraction,SVF）為基礎的細胞治療以及與富血小板血漿（platelet-rich plasma,PRP）聯(lián)合應用仍處于臨床前研究向臨床應用轉化的早期階段,需要大規(guī)模長期隨訪的臨床試驗。于體外研究SVF與PRP對骨缺損周圍骨髓間充質干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）作用,以及兩者聯(lián)合對骨缺損的修復作用。研究方法:1.無菌條件下,于SD大鼠腹股溝手術切取脂肪組織,提取大鼠左心房血液樣本。提取、培養(yǎng)SVF細胞和制備PRP。2.利用Transwell小室建立SVF與BMSCs共培養(yǎng)體系,探究SVF的旁分泌作用對BMSCs增殖和成骨分化效能影響,以及SVF與PRP聯(lián)合應用作用。結果:1.CCK-8結果顯示SVF、PRP以及SVF+PRP三組... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

A圖代表PRPB圖代表PRP凝膠

中國醫(yī)科大學碩士學位論文73結果3.1BMSCs形態(tài)學觀察及多向分化驗證BMSCs被證實可分化為成骨細胞和成脂細胞（圖3-1BC)，證實了其能夠分化為多種細胞系的潛能。圖3-1BMSCs鏡下觀A：第四代BMSCs顯微鏡下觀（10X）；B：成骨分化鑒定；C：成脂分化鑒定3.2PRP凝膠制備通過二次離心法得到PRP（圖3-2A），使用全血細胞分析儀對全血及PRP進行血小板的測定，全血和PRP中血小板濃度分析：全血和PRP中血小板濃度分別為（120.4±6.67）1011/L和(433.76±49.99)1011/L，比較差異有統(tǒng)計學意義(t=8.813，P<0.05)。凝血酶-CaCl2溶液激活劑激活PRP得到血小板活化后的PRP凝膠(如圖3-2B)。圖3-2A圖代表PRPB圖代表PRP凝膠

中國醫(yī)科大學碩士學位論文83.3SVF提取以及形態(tài)學觀察第3代SD大鼠脂肪組織來源血管基質成分SVF于鏡下觀察細胞形態(tài)，細胞呈長梭形，貼壁生長，細胞生長呈集落樣。圖3-3P3代SVF形態(tài)學觀察（倒置顯微鏡10X）3.4共培養(yǎng)BMSCs細胞增殖檢測結果為了探討SVF以及PRP是否能影響B(tài)MSCs的增殖，共培養(yǎng)2d及7d后于顯微鏡下觀察（圖3-4AB），發(fā)現(xiàn)2d時D組BMSCs增殖最明顯，7d時各組間差異不明顯。同時應用CCK8試劑盒進行了細胞增殖測定。結果如圖3-4C所示，D組（BMSCs+SVF+PRP組）BMSCs的增殖率24h以及48h明顯高于其他組。B4X

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Platelet-rich plasma enhances adipose-derived stem cell-mediated angiogenesis in a mouse ischemic hindlimb model[J]. Chia-Fang Chen,Han-Tsung Liao.  World Journal of Stem Cells. 2018(12)
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[3]Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update[J]. Louis Casteilla,Valérie Planat-Benard,Patrick Laharrague,Béatrice Cousin.  World Journal of Stem Cells. 2011(04)



本文編號：3558769