目的:探討谷氨酸受體（AMPA-GluR2）在脊髓損傷前后少突膠質(zhì)前體細胞（OPC）中的表達規(guī)律,明確AMPA-GluR2在OPCs凋亡中的作用。方法:1.無特定病原體（SPF級）雌雄不限SD大鼠60只,1-2日齡。經(jīng)斷頸、解剖、剪碎、消化、培養(yǎng)和分離提純后,獲得原代少突膠質(zhì)前體細胞。采用免疫熒光技術(shù),以抗體A2B5標記少突膠質(zhì)前體細胞,以DAPI標記細胞核,鏡下觀察并統(tǒng)計細胞純度。2.無特定病原體（SPF級）雌性SD大鼠12只,6-8周齡,體重200-250g。采用Allen’s打擊法制作SD大鼠脊髓損傷（T9）模型,使用NYU IMPACTOR MODEL-II脊髓打擊器造成T9脊髓沖擊傷,10g重物,降落高度30mm。手術(shù)后12h無菌條件下快速取出脊髓損傷動物模型組損傷處脊髓,對照組僅暴露對應脊髓節(jié)段后12h取出脊髓。利用Transwell共培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)OPC細胞,Transwell小室內(nèi)放置脊髓組織塊。依次分為對照組、脊髓損傷組、谷氨酸激動組、拮抗劑NBQX組、拮抗劑JSTX組,流式細胞檢測技術(shù)檢測各組凋亡率。3.采用western blot及免疫組化的方法檢測AMP... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Transwell共培養(yǎng)模式圖

1:1000），放于搖床上 30rpm ，4℃過夜。次日回收一抗，TBST 緩沖液浸洗三次， 10min 每次。加入稀釋好的稀釋好的二抗，室溫輕搖一小時。結(jié)束后 TBST 緩沖液浸洗三次， 10min 每次。（4）顯色、曝光：將 ECL 試劑盒中 A、B 發(fā)光液按比例稀釋混合。暗室中將 PVDF 膜放在壓片板上，再覆以保鮮膜，保鮮膜上放置感光 X 膠片。調(diào)整曝光時間，曝光后將膠片依次置于顯影液與定影液中，沖洗底片后晾干保存。1.9 統(tǒng)計學方法采用 spss16.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。各組數(shù)據(jù)采用 x±s 表示，進行兩樣本均數(shù)的 t 檢驗，以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。2．結(jié)果2.1 OPC 純度鑒定培養(yǎng)的少突膠質(zhì)前體細胞經(jīng)過免疫熒光檢測純度，以抗體 A2B5 標記 OPC，以 DAPI 標記細胞核 ，鏡下觀察，可見少突膠質(zhì)前體細胞被標記為紅色，細胞核被標記為藍色，以 Image J 處理圖片，統(tǒng)計其純度＞95%，滿足實驗要求。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 二、結(jié)果率為 6.3%，脊髓損傷組凋亡率為 36.5%，谷氨酸激動組凋亡率為 29.1%，拮抗劑 NBQX 組凋亡率為 11.8%，拮抗劑 JSTx 組凋亡率為 13.7%。脊髓損傷組與谷氨酸激動組 OPC 凋亡率明顯高于對照組（正常脊髓組）（P＜0.001），差異有統(tǒng)計學意義。拮抗劑組（NBQX/JSTx）凋亡率低于脊髓損傷組（P＜0.001），差異有統(tǒng)計學意義。拮抗劑（NBQX/JSTx）可在一定程度上提高了細胞的存活率。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]少突膠質(zhì)前體細胞分化的調(diào)節(jié)機制[J]. 蔣萌,胡懷強,林曉靜.  組織工程與重建外科雜志. 2012(01)
[2]少突膠質(zhì)前體細胞遷移調(diào)控分子研究進展[J]. 蔡沅锜,石長貴,肖林.  卒中與神經(jīng)疾病. 2011(03)
[3]大鼠Allen’s脊髓損傷模型的建立及評價[J]. 熊春翔,宗少暉,曾高峰,韋波,趙玉璽.  廣西醫(yī)科大學學報. 2011(02)
[4]少突膠質(zhì)前體細胞在髓鞘再生中作用的研究進展[J]. 張圓,楊靜,陽浩,陳鵬慧.  重慶醫(yī)學. 2010(17)
[5]少突膠質(zhì)前體細胞移植治療對大鼠脊髓損傷軸突髓鞘化的影響[J]. 吳波,孫磊,任先軍.  中華創(chuàng)傷雜志. 2010 (11)



本文編號：3546594