目的:探討谷氨酸受體（AMPA-GluR2）在脊髓損傷前后少突膠質(zhì)前體細(xì)胞（OPC）中的表達(dá)規(guī)律,明確AMPA-GluR2在OPCs凋亡中的作用。方法:1.無特定病原體（SPF級）雌雄不限SD大鼠60只,1-2日齡。經(jīng)斷頸、解剖、剪碎、消化、培養(yǎng)和分離提純后,獲得原代少突膠質(zhì)前體細(xì)胞。采用免疫熒光技術(shù),以抗體A2B5標(biāo)記少突膠質(zhì)前體細(xì)胞,以DAPI標(biāo)記細(xì)胞核,鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞純度。2.無特定病原體（SPF級）雌性SD大鼠12只,6-8周齡,體重200-250g。采用Allen’s打擊法制作SD大鼠脊髓損傷（T9）模型,使用NYU IMPACTOR MODEL-II脊髓打擊器造成T9脊髓沖擊傷,10g重物,降落高度30mm。手術(shù)后12h無菌條件下快速取出脊髓損傷動物模型組損傷處脊髓,對照組僅暴露對應(yīng)脊髓節(jié)段后12h取出脊髓。利用Transwell共培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)OPC細(xì)胞,Transwell小室內(nèi)放置脊髓組織塊。依次分為對照組、脊髓損傷組、谷氨酸激動組、拮抗劑NBQX組、拮抗劑JSTX組,流式細(xì)胞檢測技術(shù)檢測各組凋亡率。3.采用western blot及免疫組化的方法檢測AMP... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Transwell共培養(yǎng)模式圖

1:1000），放于搖床上 30rpm ，4℃過夜。次日回收一抗，TBST 緩沖液浸洗三次， 10min 每次。加入稀釋好的稀釋好的二抗，室溫輕搖一小時(shí)。結(jié)束后 TBST 緩沖液浸洗三次， 10min 每次。（4）顯色、曝光：將 ECL 試劑盒中 A、B 發(fā)光液按比例稀釋混合。暗室中將 PVDF 膜放在壓片板上，再覆以保鮮膜，保鮮膜上放置感光 X 膠片。調(diào)整曝光時(shí)間，曝光后將膠片依次置于顯影液與定影液中，沖洗底片后晾干保存。1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 spss16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。各組數(shù)據(jù)采用 x±s 表示，進(jìn)行兩樣本均數(shù)的 t 檢驗(yàn)，以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2．結(jié)果2.1 OPC 純度鑒定培養(yǎng)的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)過免疫熒光檢測純度，以抗體 A2B5 標(biāo)記 OPC，以 DAPI 標(biāo)記細(xì)胞核 ，鏡下觀察，可見少突膠質(zhì)前體細(xì)胞被標(biāo)記為紅色，細(xì)胞核被標(biāo)記為藍(lán)色，以 Image J 處理圖片，統(tǒng)計(jì)其純度＞95%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 二、結(jié)果率為 6.3%，脊髓損傷組凋亡率為 36.5%，谷氨酸激動組凋亡率為 29.1%，拮抗劑 NBQX 組凋亡率為 11.8%，拮抗劑 JSTx 組凋亡率為 13.7%。脊髓損傷組與谷氨酸激動組 OPC 凋亡率明顯高于對照組（正常脊髓組）（P＜0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。拮抗劑組（NBQX/JSTx）凋亡率低于脊髓損傷組（P＜0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。拮抗劑（NBQX/JSTx）可在一定程度上提高了細(xì)胞的存活率。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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